| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 前言 | 第14-16页 |
| 第一部分 文献综述 | 第16-28页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-28页 |
| 1.1 脂联素概述 | 第16-21页 |
| 1.1.1 脂肪组织的内分泌功能 | 第16-17页 |
| 1.1.2 脂联素的发现 | 第17页 |
| 1.1.3 脂联素的分子结构 | 第17-19页 |
| 1.1.4 脂联素受体 | 第19-20页 |
| 1.1.5 脂联素基因表达及调控 | 第20页 |
| 1.1.6 脂联素受体基因的表达及调控 | 第20-21页 |
| 1.1.7 脂联素对能量代谢和脂代谢的影响 | 第21页 |
| 1.2 脂肪细胞分化研究进展 | 第21-25页 |
| 1.2.1 前体脂肪细胞分化模型 | 第21-23页 |
| 1.2.2 脂肪细胞分化中分子事件 | 第23-24页 |
| 1.2.3 脂联素对于脂肪细胞分化的影响 | 第24-25页 |
| 1.3 线粒体研究综述 | 第25-28页 |
| 1.3.1 线粒体概括 | 第25-26页 |
| 1.3.2 线粒体与脂类代谢 | 第26页 |
| 1.3.3 脂联素与线粒体发育和功能 | 第26-28页 |
| 第二部分 试验研究 | 第28-86页 |
| 第二章 脂联素对肉鸡体脂沉积的影响 | 第28-41页 |
| 2.1 试验材料 | 第28-29页 |
| 2.1.1 试验动物与饲养管理 | 第28页 |
| 2.1.2 试验分组与处理 | 第28-29页 |
| 2.1.3 基础日粮及营养水平 | 第29页 |
| 2.2 试剂和主要仪器设备 | 第29-30页 |
| 2.2.1 主要试剂 | 第29-30页 |
| 2.2.2 主要仪器设备 | 第30页 |
| 2.3 样品采集和测定 | 第30-35页 |
| 2.3.1 屠宰和采样 | 第30页 |
| 2.3.2 生产性能测定 | 第30页 |
| 2.3.3 脂肪含量 | 第30页 |
| 2.3.4 血清中脂联素及血脂含量测定 | 第30-31页 |
| 2.3.5 Real-time PCR | 第31-33页 |
| 2.3.5.1 RNA抽提 | 第31页 |
| 2.3.5.2 反转录 | 第31页 |
| 2.3.5.3 引物及退火温度 | 第31-32页 |
| 2.3.5.4 Real-time PCR反应体系 | 第32-33页 |
| 2.3.6 Western Blot | 第33-35页 |
| 2.3.6.1 组织总蛋白的提取及含量测定 | 第33页 |
| 2.3.6.2 BCA法蛋白定量 | 第33页 |
| 2.3.6.3 蛋白质电泳 | 第33-35页 |
| 2.3.7 数据统计分析 | 第35页 |
| 2.4 结果 | 第35-38页 |
| 2.4.1 罗格列酮和地塞米松对肉鸡生产性能的影响 | 第35页 |
| 2.4.2 罗格列酮和地塞米松对肉鸡体内脂联素及其受体表达的影响 | 第35-36页 |
| 2.4.3 罗格列酮和地塞米松对肉鸡血脂水平以及体脂沉积的影响 | 第36-37页 |
| 2.4.4 罗格列酮和地塞米松对肉鸡组织中脂代谢相关基因表达的影响 | 第37-38页 |
| 2.5. 讨论 | 第38-40页 |
| 2.6 小结 | 第40-41页 |
| 第三章 脂联素对肉鸡肌肉中脂肪沉积及肉品质的影响 | 第41-51页 |
| 3.1 试验材料 | 第41-42页 |
| 3.1.1 试验动物与饲养管理 | 第41页 |
| 3.1.2 试验处理与分组 | 第41页 |
| 3.1.3 基础日粮及营养水平 | 第41-42页 |
| 3.2 试剂和主要仪器设备 | 第42页 |
| 3.2.1 主要试剂 | 第42页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第42页 |
| 3.3 样品采集和测定 | 第42-44页 |
| 3.3.1 屠宰和采样 | 第42页 |
| 3.3.2 IMF含量测定 | 第42页 |
| 3.3.3 血清中脂联素含量测定 | 第42页 |
| 3.3.4 肌肉品质测定 | 第42-43页 |
| 3.3.4.1 肌肉pH值 | 第42页 |
| 3.3.4.2 肉色测定 | 第42页 |
| 3.3.4.3 系水力 | 第42页 |
| 3.3.4.4 剪切力 | 第42-43页 |
| 3.3.4.5 丙二醛(Malondialdehyde,MDA) | 第43页 |
| 3.3.5 肌肉脂肪酸(fatty acid,FA)组成 | 第43页 |
| 3.3.6 Real-time PCR | 第43-44页 |
| 3.3.7 Western Blot | 第44页 |
| 3.3.8 数据统计分析 | 第44页 |
| 3.4 结果 | 第44-48页 |
| 3.4.1 血清脂联素水平、肌肉中脂联素及其受体基因的表达 | 第44-45页 |
| 3.4.2 肉品质分析 | 第45-46页 |
| 3.4.3 脂肪酸组成分析 | 第46-47页 |
| 3.4.4 罗格列酮和地塞米松对肌肉中脂代谢相关因子表达的影响 | 第47-48页 |
| 3.5 讨论 | 第48-49页 |
| 3.6 小结 | 第49-51页 |
| 第四章 全长脂联素对鸡脂肪细胞中脂沉积的调控机制 | 第51-62页 |
| 4.1 试验材料 | 第51-52页 |
| 4.1.1 样品、菌株、质粒 | 第51页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第51-52页 |
| 4.1.3 常用试剂配制 | 第52页 |
| 4.2 试验方法 | 第52-54页 |
| 4.2.1 small-interfering RNA(siRNA)设计 | 第52页 |
| 4.2.2 鸡前体原代脂肪细胞的分离与培养 | 第52-53页 |
| 4.2.3 pcDNA3.1-ADPN及pGPU6/GFP/Neo重组质粒转染 | 第53页 |
| 4.2.4 细胞处理 | 第53页 |
| 4.2.5 转染重组质粒细胞ADPN mRNA和蛋白的检测 | 第53页 |
| 4.2.6 脂肪细胞油红0染色 | 第53页 |
| 4.2.7 培养基中游离脂肪酸(Free fatty acid,FFA)和甘油释放 | 第53-54页 |
| 4.2.7.1 培养基中FFA测定 | 第53-54页 |
| 4.2.7.2 培养基中甘油测定 | 第54页 |
| 4.2.8 Real-time PCR检测脂代谢标志基因表达 | 第54页 |
| 4.2.9 Western blot检测脂代谢标志蛋白及信通路标志蛋白磷酸化水平 | 第54页 |
| 4.2.10 数据统计及分析 | 第54页 |
| 4.3 试验结果与分析 | 第54-60页 |
| 4.3.1 脂联素超表达载体和干扰载体的转染效率检测 | 第54-55页 |
| 4.3.2 超表达及干扰ADPN基因对鸡原代脂肪细胞中脂代谢的影响 | 第55-57页 |
| 4.3.3 超表达及干扰ADPN基因对鸡脂肪细胞中脂代谢关键基因表达的影响 | 第57-58页 |
| 4.3.4 超表达ADPN基因激活p38 MAPK/ATF-2信号通路 | 第58-59页 |
| 4.3.5 超表达ADPN抑制TOR/p70 S6Kinase信号通路 | 第59-60页 |
| 4.4 讨论 | 第60-61页 |
| 4.5 小结 | 第61-62页 |
| 第五章 重组球状脂联素通过p38 MAPK和TOR信号通路抑制鸡原代脂肪细胞脂质蓄积 | 第62-72页 |
| 5.1 材料 | 第62-63页 |
| 5.1.1 材料 | 第62页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第62页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第62-63页 |
| 5.2 试验方法 | 第63页 |
| 5.2.1 鸡前体脂肪细胞的分离培养 | 第63页 |
| 5.2.2 试验设计 | 第63页 |
| 5.2.3 油红O染色提取测胞内脂质蓄积 | 第63页 |
| 5.2.4 培养基中FFA的释放 | 第63页 |
| 5.2.5 实时定量检测脂代谢基因表达 | 第63页 |
| 5.2.6 Western蛋白印迹检测脂代谢相关蛋白以及通路磷酸化水平 | 第63页 |
| 5.2.7 数据分析 | 第63页 |
| 5.3 结果与分析 | 第63-69页 |
| 5.3.1 外源添加重组脂联素对鸡原代脂肪细胞内源脂联素及其受体表达的影响 | 第63-64页 |
| 5.3.2 外源添加重组脂联素对鸡原代脂肪细胞脂质沉积的影响 | 第64-65页 |
| 5.3.3 球状脂联素在鸡脂肪细胞中激活p38 MAPK/ATF-2信号通路 | 第65-66页 |
| 5.3.4 球状脂联素在鸡脂肪细胞中抑制TOR/p70 S6Kinase信号通路 | 第66-67页 |
| 5.3.5 球状脂联素与p38 MAPK通路对脂肪细胞分化的影响 | 第67-68页 |
| 5.3.6 球状脂联素与TOR通路对脂肪细胞分化的影响 | 第68-69页 |
| 5.4 讨论 | 第69-70页 |
| 5.5 小结 | 第70-72页 |
| 第六章 脂联素对鸡脂肪细胞分化及线粒体发育和功能调控机制 | 第72-86页 |
| 6.1. 材料与方法 | 第72-76页 |
| 6.1.1 试验材料 | 第72-73页 |
| 6.1.1.1 试验动物、腺病毒、质粒 | 第72页 |
| 6.1.1.2 主要试验试剂 | 第72-73页 |
| 6.1.1.3 主要试验仪器 | 第73页 |
| 6.1.2 试验方法 | 第73-75页 |
| 6.1.2.1 主要溶液配制 | 第73页 |
| 6.1.2.2 肉鸡原代脂肪细胞培养 | 第73页 |
| 6.1.2.3 细胞处理 | 第73页 |
| 6.1.2.4 细胞形态观察、油红O染色及Bodipy染色 | 第73页 |
| 6.1.2.5 透射电镜观察线粒体数目 | 第73-74页 |
| 6.1.2.6 JC-1染色检测线粒体膜通透性 | 第74页 |
| 6.1.2.7 JC-1染色流式细胞术 | 第74页 |
| 6.1.2.8 Cyt-c免疫荧光分析 | 第74-75页 |
| 6.1.2.9 细胞总RNA提取及Realtime-PCR检测脂代谢及线粒体标志基因表达 | 第75页 |
| 6.1.2.10 细胞总蛋白收取及Westernblot检测脂代谢、线粒体中标志蛋白和通路蛋白磷酸化水平 | 第75页 |
| 6.1.2.11 葡萄糖摄取率及培养基中游离脂肪酸含量检测 | 第75页 |
| 6.1.3 数据处理及分析 | 第75-76页 |
| 6.2 试验结果 | 第76-84页 |
| 6.2.1 超表达及干扰效率检测 | 第76页 |
| 6.2.2 脂联素对脂肪细胞中脂代谢的影响 | 第76-77页 |
| 6.2.3 脂联素对鸡原代脂肪细胞脂代谢基因表达的影响 | 第77-78页 |
| 6.2.4 脂联素对鸡原代脂肪细胞葡萄糖摄取及脂解影响 | 第78-79页 |
| 6.2.5 脂联素对鸡原代脂肪细胞线粒体发育的影响 | 第79-80页 |
| 6.2.6 脂联素对鸡原代脂肪细胞中Cyt-C表达影响 | 第80页 |
| 6.2.7 脂联素对线粒体中糖脂代谢相关标志基因及蛋白表达的影响 | 第80-81页 |
| 6.2.8 脂联素对鸡脂肪细胞线粒体通透性的影响 | 第81-83页 |
| 6.2.9 脂联素对鸡原代脂肪细胞中相关信号通路的影响 | 第83-84页 |
| 6.3 讨论 | 第84-85页 |
| 6.4 小结 | 第85-86页 |
| 结论与进一步研究计划 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-94页 |
| 缩略词 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 作者简介 | 第96页 |
