| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-26页 |
| 1 哺乳动物防御素 | 第12-19页 |
| ·哺乳动物防御素分类分布与生理功能 | 第12-17页 |
| ·哺乳动物防御素分类与分布 | 第12-14页 |
| ·防御素的生理功能 | 第14-17页 |
| ·β-防御素在乳腺组织中的表达与表达调控 | 第17-19页 |
| ·健康乳腺组织中防御素固有表达 | 第17-18页 |
| ·不同泌乳时期乳腺组织中防御素表达不同 | 第18页 |
| ·乳腺感染状态下防御素的诱导表达 | 第18-19页 |
| 2 乳腺组织特异性表达载体研究进展 | 第19-25页 |
| ·乳腺组织特异性表达载体调控元件 | 第19-22页 |
| ·调控乳蛋白基因组织特异性表达的元件 | 第20页 |
| ·调控乳蛋白基因位点独立性表达的元件 | 第20-21页 |
| ·与乳蛋白mRNA剪切过程相关的调控元件 | 第21-22页 |
| ·乳腺特异性表达载体的特点 | 第22页 |
| ·乳腺特异性表达载体的检验 | 第22-25页 |
| ·乳腺上皮细胞表达分析法 | 第22-23页 |
| ·乳腺直接注射分析法 | 第23-25页 |
| 3 研究目的与意义 | 第25-26页 |
| 第二章 奶牛BLG基因5′端调控序列克隆及其通用型乳腺特异性表达载体构建 | 第26-35页 |
| 1 试验材料与方法 | 第26-31页 |
| ·试验动物及组织 | 第26页 |
| ·主要试剂与设备 | 第26页 |
| ·引物设计与合成 | 第26-27页 |
| ·奶牛血液基因组DNA提取 | 第27页 |
| ·BLG 5′端调控序列克隆 | 第27-30页 |
| ·BLG 5′端调控序列PCR扩增与纯化 | 第27-28页 |
| ·BLG 5′片段插入T克隆载体 | 第28-29页 |
| ·阳性克隆菌株筛选 | 第29-30页 |
| ·BLG 5′调控序列指导的通用型乳腺特异性表达载体构建 | 第30-31页 |
| 2 结果与分析 | 第31-33页 |
| ·BLG 5′端调控序列PCR扩增 | 第31页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第31-32页 |
| ·BLG 5′调控序列测序分析 | 第32-33页 |
| ·通用型乳腺特异性表达载体鉴定 | 第33页 |
| 3 讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 奶牛乳腺TAP基因CDNA克隆与乳腺特异性表达载体构建 | 第35-44页 |
| 1 材料与方法 | 第35-38页 |
| ·试验动物及组织 | 第35页 |
| ·主要试剂与设备 | 第35页 |
| ·引物设计与合成 | 第35-36页 |
| ·乳腺组织总RNA提取 | 第36-37页 |
| ·RT-PCR反应和cDNA扩增 | 第37页 |
| ·TAP基因克隆与鉴定 | 第37页 |
| ·TAP基因真核表达载体构建 | 第37-38页 |
| ·TAP基因乳腺特异性表达载体构建 | 第38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-42页 |
| ·荷斯坦奶牛TAP基因RT-PCR扩增 | 第38页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第38-39页 |
| ·TAP cDNA序列分析 | 第39-41页 |
| ·TAP真核表达质粒pEGFP-C1-TAP鉴定 | 第41页 |
| ·TAP乳腺特异性表达载体pBLG-EGFP-C1-TAP鉴定 | 第41-42页 |
| 3 讨论 | 第42-44页 |
| 第四章 TAP基因在乳腺组织和体外培养细胞中的瞬时表达 | 第44-54页 |
| 1 试验材料与方法 | 第44-47页 |
| ·试验动物及组织 | 第44页 |
| ·主要试剂与设备 | 第44-45页 |
| ·TAP基因在COS7细胞中的表达 | 第45-46页 |
| ·质粒pEGFP-C1-TAP和pEGFP-C1除去内毒素 | 第45-46页 |
| ·脂质体法转染细胞 | 第46页 |
| ·原代奶牛乳腺上皮细胞的培养 | 第46-47页 |
| ·细胞培养液制备 | 第46-47页 |
| ·乳汁分离乳腺上皮细胞培养法 | 第47页 |
| ·组织块培养法培养 | 第47页 |
| ·TAP在体外培养的奶牛乳腺上皮细胞中的表达 | 第47页 |
| ·TAP基因在兔乳腺组织中表达 | 第47页 |
| 2 试验结果与分析 | 第47-52页 |
| ·TAP基因在COS7细胞中的表达 | 第47-48页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞体外培养 | 第48-50页 |
| ·乳汁分离乳腺上皮培养法 | 第48-49页 |
| ·组织块法培养乳腺细胞 | 第49-50页 |
| ·TAP基因在乳腺细胞中表达 | 第50-51页 |
| ·奶牛TAP基因在兔乳腺组织中表达 | 第51-52页 |
| 3 讨论 | 第52-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 附录 | 第63-65页 |
| 作者简介 | 第65页 |
