| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-23页 |
| 1 禽流感及禽流感病毒 | 第14-16页 |
| ·禽流感病毒(AIV)形态结构 | 第14页 |
| ·AIV分子生物学特性 | 第14-16页 |
| 2 禽流感的公共卫生意义 | 第16-18页 |
| ·对养禽业造成的危害 | 第16页 |
| ·人感染禽流感事件 | 第16-18页 |
| 3 DNA疫苗研究进展 | 第18-22页 |
| ·DNA疫苗 | 第18-19页 |
| ·DNA疫苗生物学分布 | 第19-21页 |
| ·目的组织及持续时间 | 第19-20页 |
| ·清除模式 | 第20-21页 |
| ·DNA疫苗整合可能性 | 第21-22页 |
| 4 研究目的和意义 | 第22-23页 |
| 第二章 DNA疫苗在蛋鸡体内分布研究 | 第23-47页 |
| 1 材料 | 第23页 |
| ·实验动物 | 第23页 |
| ·DNA疫苗质粒 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| 2 方法 | 第23-27页 |
| ·实验鸡分组设计 | 第23-24页 |
| ·组织器官的采集 | 第24页 |
| ·样品处理及样品中DNA模板的提取 | 第24-25页 |
| ·各组织基因组DNA含量和纯度测定 | 第25页 |
| ·两种荧光定量PCR检测质粒pCAGGoptiHA5方法的建立 | 第25-26页 |
| ·SYBR Green Ⅰ荧光染料实时定量PCR方法的建立 | 第25-26页 |
| ·TaqMan MGB探针实时定量PCR方法的建立 | 第26页 |
| ·两种定量PCR方法的比较 | 第26页 |
| ·蛋鸡各组织器官中质粒pCAGGoptiHA5含量的检测 | 第26页 |
| ·数据处理 | 第26-27页 |
| 3 结果 | 第27-44页 |
| ·SYBR GreenⅠ荧光染料实时定量PCR方法的建立 | 第27-30页 |
| ·SYBR GreenⅠ荧光染料法引物最佳退火温度的筛选 | 第27页 |
| ·SYBR GreenⅠ荧光染料法优化后的反应体系和条件 | 第27页 |
| ·SYBR Green Ⅰ荧光染料法标准曲线 | 第27-28页 |
| ·熔解曲线分析 | 第28-29页 |
| ·SYBR Green Ⅰ荧光染料法特异性,敏感性,重复性和污染率 | 第29-30页 |
| ·TaqMan MGB探针实时定量PCR方法的建立 | 第30-32页 |
| ·TaqMan MGB探针法优化后的反应体系和条件 | 第30页 |
| ·TaqMan MGB探针法标准曲线 | 第30-31页 |
| ·TaqMan MGB探针法特异性,敏感性,重复性和污染率 | 第31-32页 |
| ·两种定量PCR方法的比较 | 第32-33页 |
| ·标准曲线比较 | 第32页 |
| ·特异性,敏感性,重复性和污染率比较 | 第32-33页 |
| ·质粒pCAGGoptiHA5在蛋鸡各组织器官分布规律 | 第33-44页 |
| ·单次免疫后质粒pCAGGoptiHA5在各组织分布情况 | 第33页 |
| ·加强免疫后质粒pCAGGoptiHA5在各组织分布情况 | 第33-34页 |
| ·加强免疫组与单次免疫组比较 | 第34-44页 |
| 4 讨论 | 第44-47页 |
| ·实时荧光定量PCR技术 | 第44页 |
| ·两种荧光定量PCR方法的比较 | 第44-45页 |
| ·质粒pCAGGoptiHA5在蛋鸡各组织器官分布规律 | 第45-47页 |
| 第三章 DNA疫苗免疫后基因组整合可能性研究 | 第47-55页 |
| 1 材料 | 第47页 |
| ·实验动物 | 第47页 |
| ·主要仪器 | 第47页 |
| ·主要试剂 | 第47页 |
| 2 方法 | 第47-50页 |
| ·引物设计 | 第47-48页 |
| ·组织基因组DNA提取 | 第48页 |
| ·标记用DNA片段制备 | 第48页 |
| ·质粒pCAGGoptiHA5 PCR产物回收 | 第48页 |
| ·探针的标记 | 第48页 |
| ·探针敏感性检验 | 第48-49页 |
| ·Southern blotting | 第49-50页 |
| ·基因组DNA的限制性内切酶消化和电泳 | 第49页 |
| ·DNA转移到尼龙膜上(细管虹吸印迹法) | 第49-50页 |
| ·固定DNA于尼龙膜上 | 第50页 |
| ·预杂交,杂交及检测 | 第50页 |
| 3 结果 | 第50-53页 |
| ·探针标记用DNA片段制备的结果 | 第50-51页 |
| ·探针敏感性 | 第51页 |
| ·质粒pCAGGoptiHA5酶切结果 | 第51-52页 |
| ·质粒PCAGGoPTIHA5与鸡基因组DNA整合结果 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| 第四章 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第63页 |
