| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 文献综述 | 第12-21页 |
| 第一章 牛精子冷冻保存研究进展 | 第12-21页 |
| 引言 | 第12页 |
| 1.1 冷冻-解冻过程中影响牛精子质量的因素 | 第12-15页 |
| 1.1.1 牛精子的生化特性 | 第12-13页 |
| 1.1.2 冷冻稀释液 | 第13页 |
| 1.1.3 冷冻保护剂 | 第13-14页 |
| 1.1.4 抗生素 | 第14页 |
| 1.1.5 精液加工程序 | 第14-15页 |
| 1.2 牛精子抗冷冻损伤的机制 | 第15-18页 |
| 1.2.1 精子的抗氧化系统 | 第15-16页 |
| 1.2.2 增强精子抗氧化能力的方法 | 第16页 |
| 1.2.3 热应激蛋白对精子的保护作用 | 第16-18页 |
| 1.3 热应激蛋白70的研究进展 | 第18-20页 |
| 1.3.1 HSP70家族 | 第18页 |
| 1.3.2 HSP70基因特点与转录调控 | 第18页 |
| 1.3.3 HSP70的作用 | 第18-19页 |
| 1.3.4 精子冷冻过程中HSP70的表达 | 第19-20页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第20-21页 |
| 1.4.1 研究目的 | 第20页 |
| 1.4.2 研究意义 | 第20-21页 |
| 试验研究 | 第21-43页 |
| 第二章 牛精子总RNA提取的研究 | 第21-29页 |
| 前言 | 第21-22页 |
| 2.1 材料 | 第22页 |
| 2.1.1 试验动物 | 第22页 |
| 2.1.2 主要试剂及仪器 | 第22页 |
| 2.1.3 引物 | 第22页 |
| 2.2 方法 | 第22-24页 |
| 2.2.1 精液的采集与冷冻 | 第22页 |
| 2.2.2 精液解冻 | 第22-23页 |
| 2.2.3 试验设计 | 第23页 |
| 2.2.4 精子样本的处理 | 第23页 |
| 2.2.5 精子RNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.6 总RNA中基因组DNA污染的去除 | 第24页 |
| 2.2.7 精子总RNA纯度检测、定量分析 | 第24页 |
| 2.2.8 精子总RNA完整性检测 | 第24页 |
| 2.3 结果与分析 | 第24-27页 |
| 2.3.1 不同提取方法提取出总RNA的效果比较 | 第24-25页 |
| 2.3.2 不同精子使用量提取出总RNA的效果比较 | 第25-26页 |
| 2.3.3 精子总RNA的完整性检测 | 第26-27页 |
| 2.4 讨论 | 第27-28页 |
| 2.5 小结 | 第28-29页 |
| 第三章 冷冻保存对牛精子中HSP70基因表达量的影响 | 第29-37页 |
| 前言 | 第29-30页 |
| 3.1 材料 | 第30页 |
| 3.1.1 试验动物 | 第30页 |
| 3.1.2 主要试剂及仪器 | 第30页 |
| 3.1.3 引物 | 第30页 |
| 3.2 方法 | 第30-33页 |
| 3.2.1 精液的采集与冷冻 | 第30-31页 |
| 3.2.2 精液解冻 | 第31页 |
| 3.2.3 试验设计 | 第31页 |
| 3.2.4 RT-PCR摸索HSP70基因扩增的最佳条件 | 第31-33页 |
| 3.2.5 实时荧光定量PCR检测 | 第33页 |
| 3.3 结果与分析 | 第33-34页 |
| 3.3.1 牛精子总RNA的提取与检测 | 第33页 |
| 3.3.2 HSP70基因扩增的最佳退火温度 | 第33-34页 |
| 3.3.3 实时荧光定量PCR检测牛精子HSP70基因表达量 | 第34页 |
| 3.4 讨论 | 第34-36页 |
| 3.5 小结 | 第36-37页 |
| 第四章 HSP70基因表达量与牛精子活力关系的研究 | 第37-43页 |
| 前言 | 第37页 |
| 4.1 材料 | 第37页 |
| 4.1.1 试验动物 | 第37页 |
| 4.1.2 主要试剂及仪器 | 第37页 |
| 4.2 方法 | 第37-39页 |
| 4.2.1 精液采集与冷冻 | 第37-38页 |
| 4.2.2 精液解冻 | 第38页 |
| 4.2.3 精液品质检测 | 第38页 |
| 4.2.4 试验设计 | 第38页 |
| 4.2.5 精液样品的采集与预处理 | 第38页 |
| 4.2.6 总RNA的提取与检测 | 第38页 |
| 4.2.7 实时荧光定量PCR检测 | 第38页 |
| 4.2.8 数据分析 | 第38-39页 |
| 4.3 结果与分析 | 第39-41页 |
| 4.3.1 牛精子总RNA的提取与检测 | 第39页 |
| 4.3.2 实时荧光定量PCR检测HSP70基因表达量 | 第39-40页 |
| 4.3.3 牛精子质量的检测 | 第40页 |
| 4.3.4 HSP70基因表达量与牛精子活力的关系 | 第40-41页 |
| 4.4 讨论 | 第41-42页 |
| 4.5 小结 | 第42-43页 |
| 结论 | 第43页 |
| 需进一步研究内容 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 作者简介 | 第49页 |
