| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 1 前言 | 第12-25页 |
| 1.1 纤维素 | 第14-15页 |
| 1.2 纤维素酶的组成 | 第15页 |
| 1.3 纤维素酶的来源 | 第15-16页 |
| 1.4 纤维素酶的作用机理 | 第16-17页 |
| 1.5 纤维素酶的应用 | 第17-19页 |
| 1.6.纤维素酶活力的测定 | 第19页 |
| 1.7 课题研究背景及国外研究现状的分析 | 第19-22页 |
| 1.8 纤维素酶基因的克隆与表达 | 第22-23页 |
| 1.9 本研究的目的和意义 | 第23-25页 |
| 2 高产纤维素酶菌菌株的筛选及鉴定 | 第25-35页 |
| 2.1 材料和方法 | 第25-26页 |
| 2.1.1 样品的采集 | 第25页 |
| 2.1.2 试剂 | 第25页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-30页 |
| 2.2.1 培养基的制备 | 第26页 |
| 2.2.2 酶活力的测定 | 第26-27页 |
| 2.2.3 产纤维素酶菌的筛选 | 第27-30页 |
| 2.3 结果分析和讨论 | 第30-34页 |
| 2.3.1 菌株的筛选 | 第30-31页 |
| 2.3.2 菌株形态学鉴定结果 | 第31-32页 |
| 2.3.3 指纹代谢分析 | 第32-33页 |
| 2.3.4 菌株种属鉴定 | 第33-34页 |
| 2.4 讨论 | 第34页 |
| 2.5 结论 | 第34-35页 |
| 3 发酵条件的探索及目的菌株产酶能力的研究 | 第35-39页 |
| 3.1 材料和方法 | 第35-36页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第35页 |
| 3.1.2 仪器设备 | 第35页 |
| 3.1.3 溶液的配制 | 第35-36页 |
| 3.2 纤维素酶活力的测定 | 第36-37页 |
| 3.3 结果分析和讨论 | 第37-38页 |
| 3.3.1 发酵时间对酶活力的影响 | 第37页 |
| 3.3.2 发酵温度对酶活力的影响 | 第37页 |
| 3.3.3 含水量对生长及产酶的影响 | 第37-38页 |
| 3.4 讨论 | 第38-39页 |
| 4 地衣芽孢杆菌内切葡聚糖酶基因的克隆及表达 | 第39-53页 |
| 4.1 材料与方法 | 第39-40页 |
| 4.1.1 菌株 | 第39页 |
| 4.1.2 药品与酶 | 第39页 |
| 4.1.3 引物的设计 | 第39-40页 |
| 4.1.4 培养基和主要试剂的配制方法 | 第40页 |
| 4.2 实验方法 | 第40-47页 |
| 4.2.1 地衣芽孢杆菌总RNA的提取 ，cDNA反转录 | 第40页 |
| 4.2.2 内切葡聚糖酶基因的克隆 | 第40-41页 |
| 4.2.3 琼脂糖核酸电泳 | 第41页 |
| 4.2.4 目的片段的回收 | 第41-42页 |
| 4.2.5 连接 | 第42页 |
| 4.2.6 重组质粒转化大肠杆菌 | 第42-43页 |
| 4.2.7 质粒的提取方法 | 第43页 |
| 4.2.8 内切葡聚糖酶基因的PCR | 第43页 |
| 4.2.9 琼脂糖凝胶核酸电泳 | 第43-44页 |
| 4.2.10 双酶切反应 | 第44页 |
| 4.2.11 重组表达载体的构建 | 第44页 |
| 4.2.12 表达质粒构建 | 第44-45页 |
| 4.2.13 把目的基因转化到大肠杆菌 | 第45页 |
| 4.2.14 挑单克隆 | 第45页 |
| 4.2.15 蛋白质的诱导表达 | 第45页 |
| 4.2.16 SDS-PAGE电泳 | 第45-47页 |
| 4.2.17 地衣芽孢杆菌和工程菌的酶活力的比较 | 第47页 |
| 4.3 结果分析与讨论 | 第47-50页 |
| 4.3.1 酶基因PCR扩增 | 第47-48页 |
| 4.3.2 酶切鉴定 | 第48-49页 |
| 4.3.3 表达产物的SDS-PAGE凝胶电泳 | 第49-50页 |
| 4.3.4 酶学性质的探究 | 第50页 |
| 4.4 讨论 | 第50-52页 |
| 4.5 结语和展望 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-61页 |
| 致谢 | 第61-63页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第63-64页 |