摘要 | 第8-10页 |
ABSTRACT | 第10-12页 |
缩略语表 | 第13-15页 |
1 前言 | 第15-20页 |
1.1 喹赛多研究进展 | 第15-16页 |
1.2 mRNA差异显示技术 | 第16-18页 |
1.3 研究内容和目的意义 | 第18-20页 |
2 材料与方法 | 第20-36页 |
2.1 药品与试剂 | 第20-22页 |
2.2 仪器设备 | 第22-23页 |
2.3 引物序列 | 第23-24页 |
2.4 动物 | 第24页 |
2.5 统计分析 | 第24页 |
2.6 猪肝脏组织总RNA提取 | 第24-25页 |
2.7 DNase Ⅰ处理 | 第25-26页 |
2.8 RNA质量纯度鉴定与浓度测定 | 第26页 |
2.9 cDNA第一链的合成 | 第26页 |
2.10 cDNA质量鉴定 | 第26-27页 |
2.11 差异显示PCR | 第27页 |
2.12 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第27-28页 |
2.13 银染 | 第28页 |
2.14 从PAGE胶回收DNA | 第28页 |
2.15 二次扩增 | 第28-29页 |
2.16 回收纯化DNA | 第29页 |
2.17 目的基因克隆与鉴定 | 第29-31页 |
2.17.1 感受态细胞制备 | 第29-30页 |
2.17.2 基因克隆 | 第30页 |
2.17.3 阳性克隆鉴定 | 第30-31页 |
2.18 Northern杂交及软件分析 | 第31-33页 |
2.19 反向Northern杂交及软件分析 | 第33-34页 |
2.20 阳性差异基因片段同源性比对分析 | 第34-36页 |
3 结果 | 第36-54页 |
3.1 喹赛多对猪生长性能的影响 | 第36页 |
3.2 总RNA提取 | 第36页 |
3.3 差异显示PCR结果 | 第36-37页 |
3.4 二次扩增 | 第37页 |
3.5 阳性克隆鉴定 | 第37页 |
3.6 Northern杂交 | 第37-39页 |
3.6.1 探针标记效率鉴定 | 第38页 |
3.6.2 杂交显色及软件分析 | 第38-39页 |
3.7 反向Northern杂交 | 第39-42页 |
3.7.1 探针标记效率检测 | 第40页 |
3.7.2 杂交显色及软件分析 | 第40-42页 |
3.8 差异基因鉴定 | 第42-43页 |
3.9 差异基因序列及分析 | 第43-54页 |
3.9.1 基因A-3-4序列及分析 | 第43-45页 |
3.9.2 基因A-4-4序列及分析 | 第45-46页 |
3.9.3 基因A-6-2序列及分析 | 第46-47页 |
3.9.4 基因G-1-1序列及分析 | 第47-49页 |
3.9.5 基因G-6-1序列及分析 | 第49-50页 |
3.9.6 基因C-3-2序列及分析 | 第50-51页 |
3.9.7 基因C-5-1序列及分析 | 第51-52页 |
3.9.8 基因C-7-1序列及分析 | 第52-54页 |
4 讨论 | 第54-71页 |
4.1 总RNA的提取 | 第54-55页 |
4.3 差异显示PCR体系影响因素 | 第55-56页 |
4.4 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染方法 | 第56-57页 |
4.5 差异条带的回收和二次扩增 | 第57-58页 |
4.6 喹赛多相关基因 | 第58-63页 |
4.7 喹赛多作用机制的探讨 | 第63-64页 |
4.8 深入研究的思路 | 第64-71页 |
4.8.1 关于喹赛多作用机制的进一步研究 | 第64-67页 |
4.8.2 关于未知功能基因片段的深入研究 | 第67-71页 |
5 小结 | 第71-72页 |
6 文献综述:生物标志物及其在兽医药理学及毒理学的应用 | 第72-79页 |
参考文献 | 第79-88页 |
致谢 | 第88-89页 |
作者简介 | 第89-90页 |
附录 | 第90-99页 |
对答辩委员意见的答复 | 第99-101页 |