| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-30页 |
| 引言 | 第11页 |
| 1.1 σ因子研究进展 | 第11-15页 |
| 1.1.1 σ因子的基本结构 | 第11-13页 |
| 1.1.2 σ因子的分类及其相关特征 | 第13-15页 |
| 1.2 耐辐射异常球菌现阶段研究进展 | 第15-27页 |
| 1.2.1 耐辐射异常球菌的生理特性 | 第16页 |
| 1.2.2 耐辐射异常球菌的极端抗性 | 第16-18页 |
| 1.2.3 耐辐射异常球菌DNA损伤修复系统 | 第18-27页 |
| 1.3 σ因子在耐辐射异常球菌中的研究现状 | 第27-28页 |
| 1.4 立题依据 | 第28页 |
| 1.5 技术路线 | 第28-30页 |
| 第二章 sig1基因和sig2基因的结构分析 | 第30-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30页 |
| 2.3 结果与分析 | 第30-42页 |
| 2.3.1 Sig1和Sig2的一级结构分析 | 第30-33页 |
| 2.3.2 Sig1和Sig2的二级结构预测 | 第33-35页 |
| 2.3.3 Sig1和Sig2的蛋白三级结构在线预测 | 第35-36页 |
| 2.3.4 Sig1和Sig2蛋白的亲/疏水性分析 | 第36-37页 |
| 2.3.5 Sig1和Sig2在基因组中的位置 | 第37-38页 |
| 2.3.6 Sig1和Sig2氨基酸序列保守结构域分析 | 第38-39页 |
| 2.3.7 Sig1和Sig2与同属σ因子的氨基酸比对 | 第39-41页 |
| 2.3.8 D.radiodurans R1和其他菌株中σ因子的系统发育分析 | 第41-42页 |
| 2.4 讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 Δsig1、Δsig2和双突变Δsig1sig2的构建及其逆境胁迫抗性分析 | 第44-65页 |
| 3.1 材料与方法 | 第44-48页 |
| 3.1.1 实验菌株及质粒 | 第44页 |
| 3.1.2 实验试剂盒、酶类及生化试剂 | 第44页 |
| 3.1.3 培养基、抗生素及溶液配方 | 第44页 |
| 3.1.4 实验仪器及设备 | 第44页 |
| 3.1.5 细菌的培养 | 第44-45页 |
| 3.1.6 细菌基因组及质粒的提取 | 第45页 |
| 3.1.7 PCR反应 | 第45-47页 |
| 3.1.8 DNA片段回收及纯化 | 第47页 |
| 3.1.9 DNA片段的酶切与连接 | 第47页 |
| 3.1.10 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第47页 |
| 3.1.11 DNA线性转化方法 | 第47页 |
| 3.1.12 突变株在TGY培养基中30℃培养条件下生长曲线的测定 | 第47页 |
| 3.1.13 48℃热激对菌株的冲击实验 | 第47页 |
| 3.1.14 山梨糖醇对菌株的冲击实验 | 第47页 |
| 3.1.15 不同浓度H_2O_2对菌株的冲击实验 | 第47页 |
| 3.1.16 酸对菌株的冲击实验 | 第47-48页 |
| 3.1.17 不同浓度乙醇对菌株的冲击实验 | 第48页 |
| 3.1.18 不同浓度NaCl对菌株的冲击实验 | 第48页 |
| 3.2 结果与分析 | 第48-63页 |
| 3.2.1 突变株Δsig1的构建——融合PCR方法 | 第48-51页 |
| 3.2.2 突变株Δsig2的构建——融合PCR方法 | 第51-55页 |
| 3.2.3 突变株Δsig1sig2的构建 | 第55-57页 |
| 3.2.4 突变株在TGY培养基中30℃培养条件下生长曲线的测定sig1、sig2突变对细胞生长的影响 | 第57-58页 |
| 3.2.5 48℃热激对单突变株和双突变的影响 | 第58-59页 |
| 3.2.6 山梨糖醇对单突变株和双突变的影响 | 第59-60页 |
| 3.2.7 不同浓度H_2O_2对单突变株和双突变的影响 | 第60-61页 |
| 3.2.8 酸胁迫对单突变株和双突变的影响 | 第61页 |
| 3.2.9 不同浓度乙醇对单突变株和双突变的影响 | 第61-63页 |
| 3.2.10 不同浓度NaCl对单突变株和双突变的影响 | 第63页 |
| 3.3 讨论 | 第63-65页 |
| 3.3.1 高温胁迫中Sig1和Sig2的作用 | 第64页 |
| 3.3.2 氧化胁迫中Sig1和Sig2的作用 | 第64-65页 |
| 第四章 热激胁迫下突变株Δsig1和Δsig2转录组分析 | 第65-141页 |
| 4.1 材料与方法 | 第65-67页 |
| 4.1.1 菌株、实验仪器及试剂 | 第65页 |
| 4.1.2 转录组处理、测序及数据分析 | 第65-66页 |
| 4.1.3 细菌总RNA提取及DNA的消化 | 第66页 |
| 4.1.4 RNA浓度测定 | 第66页 |
| 4.1.5 RNA反转录合成cDNA | 第66页 |
| 4.1.6 荧光实时定量PCR | 第66-67页 |
| 4.2 结果与分析 | 第67-130页 |
| 4.2.1 转录组数据的收集 | 第67-68页 |
| 4.2.2 高温胁迫对耐辐射异常球菌基因表达的影响 | 第68-85页 |
| 4.2.3 Sig1对耐辐辐射异常球菌的影响 | 第85-93页 |
| 4.2.4 高温胁迫后Sig1对耐辐射异常球菌的影响 | 第93-102页 |
| 4.2.5 Sig2对耐辐辐射异常球菌的影响 | 第102-112页 |
| 4.2.6 高温胁迫后Sig2对耐辐射异常球菌的影响 | 第112-123页 |
| 4.2.7 高温胁迫后Sig1和Sig2基因表达调控比较 | 第123-124页 |
| 4.2.8 实时荧光定量PCR结果 | 第124-130页 |
| 4.3 讨论 | 第130-141页 |
| 4.3.1 热激条件下Sig1对核糖体蛋白表达的影响 | 第131-138页 |
| 4.3.2 突变株Δsig1和Δsig2对热激胁迫相关基因的表达影响 | 第138页 |
| 4.3.3 热激胁迫后Sig1和Sig2对MarR家族蛋白的转录调控 | 第138-141页 |
| 全文总结 | 第141-143页 |
| 参考文献 | 第143-158页 |
| 攻读博士学位期间取得的科研成果 | 第158-159页 |
| 致谢 | 第159-161页 |
| 作者简介 | 第161页 |
