| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 缩略词表 | 第14-15页 |
| 1 引言 | 第15-17页 |
| 2 试剂与设备 | 第17-21页 |
| 2.1 主要试剂 | 第17页 |
| 2.2 主要仪器与设备 | 第17页 |
| 2.3 主要溶剂的配制 | 第17-21页 |
| 3 方法 | 第21-33页 |
| 3.1 大数据分析 | 第21页 |
| 3.2 免疫组化方法验证PCNP在肺腺癌组织表达水平 | 第21-24页 |
| 3.2.1 免疫组化相关试剂的配制 | 第21-22页 |
| 3.2.2 免疫组化方法 | 第22-23页 |
| 3.2.3 上海芯超生物科技公司进行PCNP组织芯片检测 | 第23-24页 |
| 3.3 人PCNP质粒设计与鉴定 | 第24-25页 |
| 3.3.1 引物的设计,合成及稀释 | 第24页 |
| 3.3.2 载体图谱 | 第24-25页 |
| 3.4 人类CPNP干扰载体的构建 | 第25页 |
| 3.4.1 人类PCNP-RNAI引物设计 | 第25页 |
| 3.4.2 载体图谱: | 第25页 |
| 3.5 细胞培养 | 第25-26页 |
| 3.6 质粒的提取 | 第26页 |
| 3.7 细胞转染(共有四种质粒) | 第26页 |
| 3.8 细胞蛋白质的提取 | 第26-27页 |
| 3.9 测定蛋白的浓度 | 第27页 |
| 3.10 免疫印迹杂交法验证PCNP在上述细胞内表达量 | 第27-28页 |
| 3.11 过表达及敲低PCNP后A549细胞稳定株的筛选 | 第28-29页 |
| 3.12 MTS测定上述A549及稳定株细胞生长曲线 | 第29页 |
| 3.13 过表达及敲低PCNP与A549细胞迁移能力的关系 | 第29-30页 |
| 3.13.1 通过划痕实验测定A549细胞的迁移能力 | 第29-30页 |
| 3.13.2 细胞小室实验 | 第30页 |
| 3.14 过表达及敲低PCNP后对A549细胞侵袭能力的影响 | 第30-31页 |
| 3.15 过表达及敲低PCNP后对A549细胞凋亡的影响 | 第31页 |
| 3.16 统计学分析 | 第31-33页 |
| 4 结果 | 第33-57页 |
| 4.1 大数据分析结果 | 第33-35页 |
| 4.1.1 PCNP在人体正常组织器官内的RNA与蛋白水平的表达如图1 | 第33-34页 |
| 4.1.2 PCNP在各细胞系中RNA与蛋白水平的表达如图2 | 第34-35页 |
| 4.2 核蛋白PCNP在人肺腺癌组织中的表达 | 第35-47页 |
| 4.2.1 临床人肺腺癌病例资料 | 第35-36页 |
| 4.2.2 临床人肺腺癌组织与癌旁组织PCNP表达分析 | 第36-37页 |
| 4.2.3 临床人肺腺癌组织细胞浆表达与生存期关系 | 第37页 |
| 4.2.4 临床人肺腺癌组织细胞核表达与生存期关系 | 第37-38页 |
| 4.2.5 临床人肺腺癌旁组织细胞核表达与生存期关系 | 第38-39页 |
| 4.2.6 临床肺腺患者性别与生存期关系 | 第39-40页 |
| 4.2.7 临床肺腺患者年龄与生存期关系 | 第40-41页 |
| 4.2.8 临床肺腺肿瘤大小与生存期关系 | 第41-42页 |
| 4.2.9 临床肺腺肿瘤T分期与生存期关系 | 第42-43页 |
| 4.2.10 临床肺腺肿瘤N分期与生存期关系 | 第43-44页 |
| 4.2.11 临床肺腺肿瘤TNM分期与生存期关系 | 第44-45页 |
| 4.2.12 通过临床分期与生存期关系 | 第45-46页 |
| 4.2.13 临床多因素回归分析 | 第46-47页 |
| 4.3 核蛋白PCNP在人肺腺癌组织内的免疫组化结果 | 第47页 |
| 4.4 PCNP过表达及敲低重组载体的验证 | 第47-49页 |
| 4.4.1 重组载体的酶切结果 | 第47-48页 |
| 4.4.2 PCNP CDS区PCR产物BLAST结果 | 第48-49页 |
| 4.5 稳定株细胞WESTERN BLOT验证 | 第49-50页 |
| 4.6 PCNP表达水平高低对A549细胞形态的影响 | 第50页 |
| 4.7 PCNP过表达及敲低对A549细胞生长增殖能力的影响 | 第50-52页 |
| 4.7.1 MTS测细胞增殖 | 第50-51页 |
| 4.7.2 EdU测细胞增殖 | 第51-52页 |
| 4.8 PCNP过表达及敲低对A549细胞克隆形成能力的影响 | 第52-53页 |
| 4.9 PCNP过表达及敲低对A549细胞迁移能力的影响 | 第53-54页 |
| 4.9.1 划痕实验验证细胞的迁移能力 | 第53-54页 |
| 4.9.2 Transwell小室实验验证细胞迁移能力 | 第54页 |
| 4.10 PCNP过表达及敲低对A549细胞侵袭能力的影响 | 第54-55页 |
| 4.11 PCNP过表达及敲低对A549细胞凋亡的影响 | 第55-57页 |
| 5 讨论 | 第57-61页 |
| 6 结论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 综述 含有PEST基序的蛋白质与肿瘤发生的关系 | 第67-77页 |
| 参考文献 | 第73-77页 |
| 致谢 | 第77-79页 |
| 在读期间参加的学术会议及研究成果 | 第79页 |
