| 摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 拉丁文 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-29页 |
| 1.1 沙门氏菌的特征和流行现状 | 第14-15页 |
| 1.1.1 沙门氏菌的特征 | 第14页 |
| 1.1.2 沙门氏菌的流行现状 | 第14-15页 |
| 1.2 沙门氏菌检测方法研究现状 | 第15-24页 |
| 1.2.1 常规检测技术 | 第16-18页 |
| 1.2.2 以免疫学为基础的检测方法 | 第18-21页 |
| 1.2.3 分子生物学检测方法 | 第21-23页 |
| 1.2.4 仪器检测法 | 第23-24页 |
| 1.3 胶体金 | 第24-28页 |
| 1.3.1 胶体金简介 | 第24-25页 |
| 1.3.2 免疫胶体金的特性 | 第25页 |
| 1.3.3 免疫胶体金的应用 | 第25-28页 |
| 1.4 本研究的目的意义 | 第28-29页 |
| 第二章 抗甲型副伤寒沙门氏菌多克隆抗体的制备与纯化 | 第29-39页 |
| 2.1 材料 | 第29-31页 |
| 2.1.1 菌株来源 | 第29页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第29页 |
| 2.1.3 培养基 | 第29页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第29页 |
| 2.1.5 主要仪器 | 第29-30页 |
| 2.1.6 ELISA试剂的配制 | 第30页 |
| 2.1.7 蛋白质含量试剂的配制 | 第30页 |
| 2.1.8 SDS-PAGE缓冲液的配制 | 第30-31页 |
| 2.2 方法 | 第31-34页 |
| 2.2.1 多克隆抗体的制备 | 第31-32页 |
| 2.2.2 多克隆抗体的纯化与鉴定 | 第32-34页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第34-37页 |
| 2.3.1 甲型副伤寒沙门氏菌的形态 | 第34页 |
| 2.3.2 兔多克隆抗体的产生进程 | 第34-35页 |
| 2.3.3 间接ELISA检测兔多克隆抗体的效价 | 第35-36页 |
| 2.3.4 兔多克隆抗体蛋白质含量的测定 | 第36页 |
| 2.3.5 多克隆抗体纯度及分子量的测定 | 第36-37页 |
| 2.4 讨论 | 第37页 |
| 2.4.1 抗原制备 | 第37页 |
| 2.4.2 免疫剂量 | 第37页 |
| 2.4.3 采血 | 第37页 |
| 2.5 小结 | 第37-39页 |
| 第三章 抗甲型副伤寒沙门氏菌单克隆抗体的制备与纯化 | 第39-53页 |
| 3.1 材料 | 第39-41页 |
| 3.1.1 菌株来源 | 第39页 |
| 3.1.2 实验细胞 | 第39页 |
| 3.1.3 实验动物 | 第39页 |
| 3.1.4 培养液及主要试剂 | 第39页 |
| 3.1.5 主要仪器 | 第39-40页 |
| 3.1.6 细胞融合培养液及主要试剂配制 | 第40页 |
| 3.1.7 ELISA试剂的配制 | 第40-41页 |
| 3.1.8 SDS-PAGE缓冲液的配制 | 第41页 |
| 3.2 方法 | 第41-46页 |
| 3.2.1 菌株的活化和抗原的制备 | 第41页 |
| 3.2.2 免疫方案 | 第41-42页 |
| 3.2.3 间接ELISA检测小鼠免疫情况 | 第42页 |
| 3.2.4 SP2/0骨髓瘤细胞的复苏和培养 | 第42页 |
| 3.2.5 饲养细胞的制备 | 第42-43页 |
| 3.2.6 SP2/0骨髓瘤细胞的制备 | 第43页 |
| 3.2.7 免疫脾细胞的制备 | 第43页 |
| 3.2.8 细胞融合 | 第43页 |
| 3.2.9 阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第43-44页 |
| 3.2.10 杂交瘤细胞的克隆化 | 第44页 |
| 3.2.11 杂交瘤细胞的扩大培养和冻存 | 第44页 |
| 3.2.12 单克隆抗体的大量制备 | 第44页 |
| 3.2.13 单克隆抗体的纯化 | 第44-45页 |
| 3.2.14 单克隆抗体蛋白含量的测定 | 第45页 |
| 3.2.15 间接ELISA检测单克隆抗体的效价 | 第45页 |
| 3.2.16 单克隆抗体纯度及分子量的测定 | 第45页 |
| 3.2.17 甲型副伤寒沙门氏菌单克隆抗体与多克隆抗体的配对 | 第45-46页 |
| 3.3 结果与分析 | 第46-51页 |
| 3.3.1 免疫小鼠抗体效价的测定 | 第46页 |
| 3.3.2 细胞融合与阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第46-49页 |
| 3.3.3 杂交瘤细胞的克隆化培养与细胞的冻存 | 第49页 |
| 3.3.4 单克隆抗体大量制备和纯化 | 第49页 |
| 3.3.5 单克隆抗体的纯化和蛋白含量的测定 | 第49页 |
| 3.3.6 单克隆抗体纯度及分子量的测定 | 第49-50页 |
| 3.3.7 间接ELISA检测单克隆抗体的效价 | 第50-51页 |
| 3.3.8 甲型副伤寒沙门氏菌单克隆抗体与多克隆抗体的配对 | 第51页 |
| 3.4 讨论 | 第51-52页 |
| 3.4.1 细胞融合 | 第51-52页 |
| 3.4.2 杂交瘤的筛选 | 第52页 |
| 3.4.3 杂交瘤的克隆化 | 第52页 |
| 3.5 小结 | 第52-53页 |
| 第四章 金标抗体的制备及其稳定配方的选择 | 第53-63页 |
| 4.1 材料 | 第53页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第53页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第53页 |
| 4.1.3 容器的准备和溶液的配制 | 第53页 |
| 4.2 方法 | 第53-55页 |
| 4.2.1 胶体金的制备 | 第53-54页 |
| 4.2.2 胶体金粒径与加入柠檬酸三钠溶液的对应关系 | 第54页 |
| 4.2.3 最佳蛋白浓度的确定 | 第54页 |
| 4.2.4 最佳pH值的确定 | 第54页 |
| 4.2.5 金标探针复合物的制备 | 第54页 |
| 4.2.6 胶体金粒径的选择 | 第54-55页 |
| 4.2.7 金标抗体稀释液缓冲体系的选择 | 第55页 |
| 4.2.8 糖对金标抗体稳定性的影响 | 第55页 |
| 4.3 结果 | 第55-61页 |
| 4.3.1 胶体金粒径与加入柠檬酸三钠溶液的对应关系 | 第55-57页 |
| 4.3.2 最佳抗体浓度 | 第57页 |
| 4.3.3 最佳pH值 | 第57-58页 |
| 4.3.4 金标抗体偶联后的性质 | 第58-59页 |
| 4.3.5 胶体金粒径的选择 | 第59-60页 |
| 4.3.6 金标抗体稀释液缓冲体系的选择 | 第60页 |
| 4.3.7 糖对金标抗体稳定性的影响 | 第60-61页 |
| 4.4 讨论 | 第61-62页 |
| 4.4.1 玻璃仪器和实验用水的处理 | 第61页 |
| 4.4.2 1%氯金酸的保存 | 第61-62页 |
| 4.4.3 胶体金溶液的制备方法 | 第62页 |
| 4.5 小结 | 第62-63页 |
| 第五章 甲型副伤寒沙门氏菌免疫层析试纸条的制备及研究 | 第63-71页 |
| 5.1 材料 | 第63页 |
| 5.1.1 主要试剂和试纸条材料 | 第63页 |
| 5.1.2 免疫层析试剂的配制 | 第63页 |
| 5.2 方法 | 第63-65页 |
| 5.2.1 免疫层析试纸条各组分的前处理和制备 | 第63-64页 |
| 5.2.2 免疫层析试纸条的组装 | 第64页 |
| 5.2.3 夹心模式试纸条的判定标准 | 第64-65页 |
| 5.2.4 控制线抗体浓度的选择 | 第65页 |
| 5.2.5 检测线抗体浓度的选择 | 第65页 |
| 5.2.6 试纸条的检测限 | 第65页 |
| 5.2.7 试纸条的特异性 | 第65页 |
| 5.2.8 试纸条的稳定性 | 第65页 |
| 5.3 结果 | 第65-70页 |
| 5.3.1 控制线抗体浓度的选择 | 第65-66页 |
| 5.3.2 检测线抗体浓度的选择 | 第66-67页 |
| 5.3.3 试纸条检测限的确定 | 第67页 |
| 5.3.4 试纸条的特异性 | 第67-69页 |
| 5.3.5 试纸条的稳定性 | 第69-70页 |
| 5.4 讨论 | 第70页 |
| 5.4.1 试纸条的稳定性 | 第70页 |
| 5.4.2 NC膜的选择 | 第70页 |
| 5.5 小结 | 第70-71页 |
| 第六章 结论 | 第71-73页 |
| 6.1 研究总结 | 第71页 |
| 6.2 创新 | 第71-72页 |
| 6.3 研究展望 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
