| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 第1章 绪论 | 第11-23页 |
| 1.1 埃博霉素研究进展 | 第11-19页 |
| 1.1.1 埃博霉素概述 | 第11页 |
| 1.1.2 埃博霉素的结构及理化性质 | 第11-13页 |
| 1.1.3 埃博霉素的临床研究 | 第13页 |
| 1.1.4 埃博霉素的化学合成 | 第13页 |
| 1.1.5 埃博霉素的生物合成 | 第13-17页 |
| 1.1.6 通过异源表达和调控提高埃博霉素的产量 | 第17-19页 |
| 1.2 Red/ET重组工程 | 第19-21页 |
| 1.2.1 Red/ET重组工程简介 | 第19页 |
| 1.2.2 Red/ET重组的原理 | 第19-20页 |
| 1.2.3 RecE/RecT介导的多个片段的重组 | 第20页 |
| 1.2.4 诱导性启动子P_(tet)与P_(BAD) | 第20-21页 |
| 1.3 立题依据和意义 | 第21-23页 |
| 第2章 实验方法与材料 | 第23-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-29页 |
| 2.1.1 供试菌株、质粒 | 第23-24页 |
| 2.1.2 培养基和抗生素 | 第24-25页 |
| 2.1.3 寡核苷酸合成和DNA测序 | 第25-27页 |
| 2.1.4 分子生物学试剂 | 第27页 |
| 2.1.5 DNA序列分析软件 | 第27-28页 |
| 2.1.6 仪器设备清单 | 第28-29页 |
| 2.2 基础分子生物学实验方法 | 第29-36页 |
| 2.2.1 革兰阴性细菌基因组DNA的制备 | 第29页 |
| 2.2.2 PCR(polymerase chain reaction)反应及产物纯化 | 第29-33页 |
| 2.2.3 酶切与T4连接酶连接体系 | 第33页 |
| 2.2.4 电转化方法 | 第33-35页 |
| 2.2.5 碱裂解法小提革兰阴性菌质粒方法和酶切鉴定反应体系 | 第35页 |
| 2.2.6 测序鉴定 | 第35-36页 |
| 2.3 伯克氏菌DSM7029重组子生长曲线测定 | 第36页 |
| 2.4 LLHR构建埃博霉素异源表达相关调控载体 | 第36-38页 |
| 2.4.1 构建潜在转运蛋白基因异源表达载体 | 第36-37页 |
| 2.4.2 三重LLHR构建丙酰CoA羧化酶异源表达载体 | 第37-38页 |
| 2.5 LCHR构建相关异源表达调控载体转座载体 | 第38-41页 |
| 2.5.1 构建epoK基因异源组成型表达载体 | 第38-39页 |
| 2.5.2 构建自杀型埃博霉素基因簇基因打靶载体 | 第39-40页 |
| 2.5.3 构建埃博霉素基因簇与丙酰CoA羧化酶基因转座载体 | 第40-41页 |
| 2.6 在基因工程菌株G32中导入埃博霉素调控基因表达载体 | 第41页 |
| 2.7 向基因工程菌株G32中转入自杀型基因打靶载体 | 第41页 |
| 2.8 伯克氏菌DSM7029的发酵流程与化合物的初提,鉴定 | 第41-43页 |
| 第3章 结果与分析 | 第43-60页 |
| 3.1 生长曲线测定结果 | 第43页 |
| 3.2 鉴定潜在埃博霉素转运蛋白过表达载体pRK2-apra~R-orf14-orf3 | 第43-44页 |
| 3.3 鉴定scpccAB基因表达载体 | 第44-46页 |
| 3.4 鉴定epoK基因组成型表达载体 | 第46-48页 |
| 3.5 鉴定自杀型基因打靶载体 | 第48-50页 |
| 3.6 鉴定自杀型转座载体 | 第50-52页 |
| 3.7 利用基因打靶载体将埃博霉素基因簇插入到基因组中 | 第52-54页 |
| 3.8 在伯克氏菌中检测潜在转运蛋白基因和丙酰CoA羧化酶基因 | 第54页 |
| 3.9 鉴定工程菌株发酵产物中的埃博霉素 | 第54-57页 |
| 3.10 比较基因工程菌株发酵产物中的各埃博霉素衍生物产量 | 第57-60页 |
| 第4章 讨论 | 第60-62页 |
| 4.1 伯克氏菌DSM7029中异源表达载体的构建与转化 | 第60-62页 |
| 第5章 结论和展望 | 第62-64页 |
| 5.1 结论 | 第62页 |
| 5.2 展望 | 第62-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 缩略表(中英文对照) | 第70-71页 |
| 附录 | 第71页 |
| 受资助的基金项目 | 第71-72页 |
