| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 绪论 | 第9-17页 |
| 1.1 L-哌啶甲酸概况 | 第9-13页 |
| 1.1.1 L-哌啶甲酸性质 | 第9页 |
| 1.1.2 L-哌啶甲酸的用途与市场概况 | 第9-11页 |
| 1.1.3 L-哌啶甲酸的生产方法 | 第11-13页 |
| 1.1.4 微生物中合成哌啶甲酸的各种途径 | 第13页 |
| 1.2 本课题的研究意义和内容 | 第13-17页 |
| 1.2.1 本课题的研究意义 | 第13-14页 |
| 1.2.2 本课题的研究内容 | 第14-17页 |
| 2 材料和方法 | 第17-43页 |
| 2.1 材料 | 第17-20页 |
| 2.1.1 菌种 | 第17-18页 |
| 2.1.2 主要药品和试剂的配制方法 | 第18-19页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第19-20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-30页 |
| 2.2.1 培养基配制方法 | 第20页 |
| 2.2.2 菌种的活化与保藏 | 第20-21页 |
| 2.2.3 分子常规实验方法 | 第21-27页 |
| 2.2.4 基因敲除 | 第27-30页 |
| 2.3 载体构建 | 第30-43页 |
| 2.3.1 构建重组质粒pLMAIP-01 | 第30-32页 |
| 2.3.2 构建重组质粒pLMAIP-02 | 第32-34页 |
| 2.3.3 构建重组质粒pLMAIP-03 | 第34-36页 |
| 2.3.4 构建重组质粒pLMAIP-04 | 第36-38页 |
| 2.3.5 L-pipecolic acid检测方法 | 第38-40页 |
| 2.3.6 L-lysine检测方法 | 第40-41页 |
| 2.3.7 发酵样品预处理 | 第41页 |
| 2.3.8 生长曲线测定 | 第41-43页 |
| 3 结果与讨论 | 第43-56页 |
| 3.1 单基因途径合成L-哌啶甲酸 | 第43-45页 |
| 3.1.1 异源表达赖氨酸氧化脱氨酶 | 第43页 |
| 3.1.2 不同生物合成方法对产量的影响 | 第43-45页 |
| 3.2 多基因异源代谢加强途径合成L-哌啶甲酸 | 第45-48页 |
| 3.2.1 重组菌的生长特征及稳定性分析 | 第45-46页 |
| 3.2.2 不同底物对合成L-哌啶甲酸的影响 | 第46页 |
| 3.2.3 不同底物浓度对生产L-哌啶甲酸的影响 | 第46-48页 |
| 3.3 多基因异源代谢途径优化 | 第48-52页 |
| 3.3.1 敲除基因cadA对合成L-PA的影响 | 第48-49页 |
| 3.3.2 启动子替换对合成L-PA的影响 | 第49-50页 |
| 3.3.3 优化RBS对合成L-PA的影响 | 第50-51页 |
| 3.3.4 强化赖氨酸转运蛋白对合成L-PA的影响 | 第51页 |
| 3.3.5 不同IPTG浓度对合成L-哌啶甲酸的影响 | 第51-52页 |
| 3.4 发酵罐发酵产L-哌啶甲酸 | 第52-56页 |
| 3.4.1 对比不同工程菌的生长曲线 | 第52-53页 |
| 3.4.2 优化培养和补料方式对合成L-哌啶甲酸的影响 | 第53-56页 |
| 4 结论与展望 | 第56-58页 |
| 4.1 结论 | 第56-57页 |
| 4.2 展望 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 附录 | 第64-70页 |
| A 作者在攻读学位期间发表和已完成的论文及专利 | 第64页 |
| B 部分序列信息 | 第64-70页 |
