| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-25页 |
| 1.1 桂花简介 | 第11-14页 |
| 1.1.1 桂花研究的发展史 | 第11页 |
| 1.1.2 木樨属植物的起源与进化 | 第11-12页 |
| 1.1.3 桂花的分布 | 第12页 |
| 1.1.4 桂花的分类 | 第12-13页 |
| 1.1.5 桂花花香研究进展 | 第13-14页 |
| 1.2 类胡罗卜素裂解双加氧酶（CCD）基因的研究进展 | 第14-17页 |
| 1.2.1 CCD基因简介 | 第14-15页 |
| 1.2.2 CCD基因的作用 | 第15-16页 |
| 1.2.3 CCD基因在桂花所参与的代谢功能 | 第16-17页 |
| 1.3 转录因子调控相关基因的技术原理及应用 | 第17-24页 |
| 1.3.1 转录因子简介 | 第17页 |
| 1.3.2 WRKY转录因子的起源 | 第17-18页 |
| 1.3.3 WRKY基因的结构 | 第18-19页 |
| 1.3.4 WRKY家族的生物学功能 | 第19-21页 |
| 1.3.5 EMSA技术 | 第21-22页 |
| 1.3.6 亚细胞定位技术 | 第22-23页 |
| 1.3.7 烟草叶片瞬时转化技术 | 第23页 |
| 1.3.8 瞬时转化超表达检测技术 | 第23-24页 |
| 1.4 本研究的目的及意义 | 第24-25页 |
| 第二章 OfWRKY3与OfCCD4在桂花花瓣中的表达模式 | 第25-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第25页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第25页 |
| 2.1.2 实验仪器与药品试剂 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-28页 |
| 2.2.1 花瓣RNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.2 RNA琼脂糖凝胶电泳检测 | 第26页 |
| 2.2.3 RNA反转录 | 第26-27页 |
| 2.2.4 WRKY3基因与CCD4基因表达量的检测 | 第27-28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-30页 |
| 2.3.1 RT-PCR分析花瓣在不同时期WRKY基因与CCD4基因的的表达量 | 第28-29页 |
| 2.3.2 荧光定量PCR分析经激素处理后OfWRKY3与OfCCD4的表达量 | 第29-30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-31页 |
| 第三章 OfWRKY3转录因子亚细胞定位分析 | 第31-37页 |
| 3.1 实验材料 | 第31页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第31页 |
| 3.1.2 质粒载体与菌株 | 第31页 |
| 3.1.3 实验仪器与药品试剂 | 第31页 |
| 3.2 试验方法 | 第31-35页 |
| 3.2.1 目的基因的扩增、纯化与酶切 | 第31-32页 |
| 3.2.2 质粒的提取与酶切 | 第32-33页 |
| 3.2.3 35S-OfWRKY3-GFP超表达重组质粒的构建与大肠杆菌的转化 | 第33-34页 |
| 3.2.4 35S-OfWRKY3-GFP超表达重组质粒的检测与农杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第34-35页 |
| 3.2.5 烟草转化与亚细胞定位观察 | 第35页 |
| 3.3 结果与分析 | 第35-36页 |
| 3.3.1 35S-OfWRKY3-GFP重组质粒的构建 | 第35-36页 |
| 3.3.2 转化烟草的亚细胞定位观察 | 第36页 |
| 3.4 讨论 | 第36-37页 |
| 第四章 OfWRKY3在桂花花瓣中的瞬时转化实验 | 第37-41页 |
| 4.1 实验材料 | 第37页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第37页 |
| 4.1.2 质粒载体与菌株 | 第37页 |
| 4.1.3 实验仪器与药品试剂 | 第37页 |
| 4.2 试验方法 | 第37-38页 |
| 4.2.1 目的基因的扩增、纯化与酶切 | 第37页 |
| 4.2.2 质粒的提取与酶切 | 第37页 |
| 4.2.3 35S-OfWRKY3重组载体的构建与大肠杆菌的转化 | 第37-38页 |
| 4.2.4 超表达重组质粒的检测与农杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第38页 |
| 4.2.5 桂花花瓣的转化 | 第38页 |
| 4.2.6 桂花花瓣的超表达检测 | 第38页 |
| 4.3 结果与分析 | 第38-39页 |
| 4.4 讨论 | 第39-41页 |
| 第五章 烟草转化实验验证OfWRKY3对CCD4基因表达的调控 | 第41-47页 |
| 5.1 实验材料 | 第41页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第41页 |
| 5.1.2 质粒载体与菌株 | 第41页 |
| 5.1.3 实验仪器与药品试剂 | 第41页 |
| 5.2 试验方法 | 第41-43页 |
| 5.2.1 花瓣DNA的提取 | 第41页 |
| 5.2.2 目的基因的扩增、纯化与酶切 | 第41-42页 |
| 5.2.3 质粒的提取与酶切 | 第42页 |
| 5.2.4 OfCCD4-GUS靶质粒的构建与大肠杆菌的转化 | 第42页 |
| 5.2.5 OfCCD4-GUS靶质粒的检测、纯化 | 第42页 |
| 5.2.6 农杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第42页 |
| 5.2.7 35S-OfWRKY3超表达载体和OfCCD4-GUS靶质粒共转化 | 第42页 |
| 5.2.8 烟草GUS染色 | 第42-43页 |
| 5.3 结果与分析 | 第43-44页 |
| 5.3.1 OfCCD4-GUS重组质粒的构建 | 第43-44页 |
| 5.3.2 35S-OfWRKY3超表达载体和OfCCD4-GUS靶质粒共转化的GUS染色 | 第44页 |
| 5.4 讨论 | 第44-47页 |
| 第六章 EMSA实验验证OfWRKY3蛋白与OfCCD4启动子的相互作用 | 第47-55页 |
| 6.1 实验材料 | 第47页 |
| 6.1.1 质粒载体与菌株 | 第47页 |
| 6.1.2 实验仪器与药品试剂 | 第47页 |
| 6.2 试验方法 | 第47-51页 |
| 6.2.1 目的基因的扩增、纯化与酶切 | 第47-48页 |
| 6.2.2 质粒的双酶切与连接 | 第48页 |
| 6.2.3 重组质粒的转化与检测 | 第48页 |
| 6.2.4 诱导目的蛋白的表达、检测 | 第48-49页 |
| 6.2.5 目的蛋白的纯化 | 第49-50页 |
| 6.2.6 EMSA实验 | 第50-51页 |
| 6.3 结果与分析 | 第51-52页 |
| 6.3.1 目的蛋白的诱导表达与纯化 | 第51页 |
| 6.3.2 EMSA验证实验 | 第51-52页 |
| 6.4 讨论 | 第52-55页 |
| 第七章 结论 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-69页 |
| 致谢 | 第69-71页 |
| 在校期间获得的奖励和科研成果 | 第71-72页 |
