| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-22页 |
| ·前言 | 第11页 |
| ·转座子概述 | 第11-16页 |
| ·转座子类型 | 第11-14页 |
| ·转座子的转座机制 | 第14-15页 |
| ·睡美人(Sleeping Beauty, SB)转座系统的转座机制 | 第14页 |
| ·反转录转座子的转座机制 | 第14-15页 |
| ·转座子的功能启动 | 第15-16页 |
| ·MLE 转座子研究进展 | 第16-18页 |
| ·mariner-like 转座子概述 | 第16页 |
| ·mariner-like 转座子的特点 | 第16页 |
| ·mariner-like 转座子的转座机制 | 第16-17页 |
| ·植物mariner-like 转座子研究 | 第17-18页 |
| ·转座子的应用 | 第18-19页 |
| ·构建突变体库 | 第18页 |
| ·利用转座子标签法分离基因 | 第18页 |
| ·利用转座子培育转基因动物 | 第18页 |
| ·鉴别菌株及群体多样性 | 第18页 |
| ·基因修复和基因治疗 | 第18-19页 |
| ·mariner-like 转座子的应用研究 | 第19页 |
| ·小结 | 第19-20页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第20页 |
| ·本研究的策略 | 第20-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-43页 |
| ·材料 | 第22-29页 |
| ·植物材料 | 第22页 |
| ·菌株与质粒 | 第22页 |
| ·各种酶类 | 第22页 |
| ·试剂盒 | 第22页 |
| ·主要仪器与设备 | 第22-23页 |
| ·试剂 | 第23-26页 |
| ·引物与接头 | 第26-29页 |
| ·实验方法 | 第29-43页 |
| ·毛竹MLE 转座子全长(Phmar1 和Phmar2)的分离 | 第29-35页 |
| ·基因组DNA 提取 | 第29-30页 |
| ·MLE 转座子片段的PCR 扩增 | 第30页 |
| ·PCR 产物的克隆 | 第30-32页 |
| ·测序 | 第32页 |
| ·毛竹基因组步行文库的构建 | 第32-33页 |
| ·Pha 的延伸 | 第33-35页 |
| ·第一次PCR | 第33-34页 |
| ·第一次PCR 产物回收 | 第34页 |
| ·第二次PCR | 第34页 |
| ·第二次PCR 产物克隆 | 第34-35页 |
| ·测序 | 第35页 |
| ·Phb 的延伸 | 第35页 |
| ·扩增片段的拼接及MLE 转座子全长的结构分析 | 第35页 |
| ·竹亚科MLE 转座酶全长的克隆、鉴定与进化 | 第35-37页 |
| ·基因组DNA 提取 | 第35页 |
| ·MLE 转座酶PCR 扩增 | 第35-36页 |
| ·ITS 序列PCR 扩增 | 第36页 |
| ·PCR 产物克隆 | 第36页 |
| ·测序 | 第36页 |
| ·MLE 转座酶全长的结构分析 | 第36页 |
| ·MLE 转座酶全长的多态性与系统发育分析 | 第36-37页 |
| ·竹亚科MLE 转座子在酵母中的转座活性检测 | 第37-43页 |
| ·菲白竹MLE 转座子全长(Samar1)的分离 | 第37-38页 |
| ·转座酶ORF 外显子拼接 | 第38页 |
| ·转座酶CDS 序列与载体pAG413GAL-ccdB 连接 | 第38-39页 |
| ·非自主转座子的获得 | 第39页 |
| ·非自主转座子与供体质粒pWL89a 连接 | 第39-40页 |
| ·转化酵母 | 第40-41页 |
| ·筛选 | 第41页 |
| ·验证 | 第41-43页 |
| ·菌落PCR 及测序 | 第41页 |
| ·反向PCR 及测序 | 第41-43页 |
| 3 实验结果与分析 | 第43-67页 |
| ·毛竹MLE 转座子全长(Phmar1 和Phmar2)的分离 | 第43-52页 |
| ·DNA 的提取 | 第43页 |
| ·MLE 转座子片段的PCR 扩增结果 | 第43-44页 |
| ·PCR 产物克隆 | 第44-45页 |
| ·蓝白斑筛选 | 第44页 |
| ·菌液PCR 检测 | 第44页 |
| ·重组质粒DNA 的提取 | 第44-45页 |
| ·Pha 和Phb 的序列分析 | 第45-46页 |
| ·步行文库构建 | 第46页 |
| ·Pha 的延伸 | 第46-47页 |
| ·Phb 的延伸 | 第47-48页 |
| ·测序结果与序列分析 | 第48-52页 |
| ·竹亚科MLE 转座酶全长的克隆、鉴定与进化 | 第52-63页 |
| ·DNA 的提取 | 第52页 |
| ·MLE 转座酶PCR 扩增结果 | 第52-53页 |
| ·ITS 序列PCR 扩增结果 | 第53-56页 |
| ·PCR 产物克隆 | 第56页 |
| ·蓝白斑筛选 | 第56页 |
| ·菌液PCR 检测 | 第56页 |
| ·测序结果及序列分析 | 第56-59页 |
| ·MLE 转座酶的系统演化分析 | 第59-63页 |
| ·竹亚科MLE 转座子在酵母中转座活性检测 | 第63-67页 |
| ·转座酶Sa-1 的TIRs 的分离 | 第63-64页 |
| ·转座子全长(Samar1)的分离 | 第64-65页 |
| ·转化酵母 | 第65-67页 |
| 4 结论与讨论 | 第67-69页 |
| ·基于磁珠富集的基因组步行法是扩增长片段的有效途径 | 第67页 |
| ·MLE 转座酶在竹亚科广泛分布并大量存在 | 第67页 |
| ·克隆的MLE 转座酶源自同一祖先并受到负选择作用 | 第67-68页 |
| ·一个天然活性转座子的获得 | 第68-69页 |
| 5 展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 个人简介 | 第76页 |
| 发表论文情况 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |