猪不同肌纤维类型中转录组差异表达的miRNAs生物学功能研究
| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 符号说明 | 第9-12页 |
| 1. 文献综述 | 第12-18页 |
| 1.1 骨骼肌 | 第12-13页 |
| 1.1.1 骨骼肌的分类 | 第12-13页 |
| 1.1.2 骨骼肌的重要性 | 第13页 |
| 1.2 肌纤维类型分子研究进展 | 第13-14页 |
| 1.3 miRNA参与骨骼肌异质性形成 | 第14-15页 |
| 1.4 miRNA研究方法 | 第15-16页 |
| 1.5 miRNA功能研究方法 | 第16-17页 |
| 1.5.1 HITS-CLIP | 第16页 |
| 1.5.2 降解组测序 | 第16页 |
| 1.5.3 荧光素酶报告系统 | 第16-17页 |
| 1.6 在线生物信息软件预测 | 第17页 |
| 1.7 本研究的目的和意义 | 第17-18页 |
| 2. 材料与方法 | 第18-29页 |
| 2.1 实验动物和样品的采集 | 第18-19页 |
| 2.1.1 实验前的准备 | 第18页 |
| 2.1.2 组织样本的采集 | 第18-19页 |
| 2.2 验证MyHC基因引物的特异性 | 第19-21页 |
| 2.2.1 琼脂糖凝胶电泳 | 第19页 |
| 2.2.2 克隆 | 第19-21页 |
| 2.2.3. 菌液PCR | 第21页 |
| 2.3 RT-PCR | 第21-26页 |
| 2.3.1 mRNA的提取 | 第21-22页 |
| 2.3.2 mRNA的反转录和定量 | 第22-23页 |
| 2.3.3 miRNA的反转录和定量 | 第23-26页 |
| 2.4 线粒体拷贝数 | 第26-27页 |
| 2.4.1 基因组DNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.4.2 线粒体拷贝数的定量 | 第27页 |
| 2.5 小RNA文库的构建 | 第27-28页 |
| 2.6. 测序数据的基本处理 | 第28页 |
| 2.7 测序数据的分类 | 第28页 |
| 2.8 miRNA差异分析 | 第28页 |
| 2.9 功能分析 | 第28-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-51页 |
| 3.1 典型代表肌纤维组织 | 第29-31页 |
| 3.2 高通量测序结果 | 第31-35页 |
| 3.3 高丰度的miRNAs | 第35-40页 |
| 3.4 差异miRNAs的鉴定 | 第40-46页 |
| 3.5 与肌生成相关的miRNA | 第46-49页 |
| 3.6 与能量代谢相关的miRNA | 第49-51页 |
| 4 讨论 | 第51-55页 |
| 4.1 典型肌纤维类型组织的选择 | 第51-53页 |
| 4.2 miRNAs测序结果的可靠性 | 第53页 |
| 4.3 差异表达的miRNAs的生物学功能 | 第53-54页 |
| 4.4 与功能相关的主效miRNA | 第54-55页 |
| 5 结论 | 第55-57页 |
| 6 参考文献 | 第57-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 附录 | 第67-82页 |
| 附件1 猪已知高丰度特异的miRNAs | 第67-81页 |
| 附件2 三个组织差异表达miRNAs分层聚类图 | 第81-82页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第82页 |
