| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-28页 |
| ·研究目的与意义 | 第14页 |
| ·防御素研究进展 | 第14-22页 |
| ·防御素的来源及分类 | 第15-16页 |
| ·防御素生物学活性 | 第16-17页 |
| ·防御素构效关系研究进展 | 第17-22页 |
| ·多肽基因串联多聚体构建策略 | 第22-24页 |
| ·多肽基因串联多聚体构建方法 | 第22-23页 |
| ·多聚体产物的切割 | 第23-24页 |
| ·本课题菌丝霉素PLECTASIN 研究进展 | 第24-26页 |
| ·Plectasin 的发现 | 第24页 |
| ·Plectasin 的结构 | 第24页 |
| ·Plectasin 的生物学活性 | 第24-25页 |
| ·Plectasin 的抑菌机制 | 第25-26页 |
| ·本研究思路、目的和意义 | 第26-28页 |
| ·本研究思路 | 第26-27页 |
| ·本研究目的和意义 | 第27-28页 |
| 第二章 二硫键对PLECTASIN 抗菌活性的影响 | 第28-41页 |
| ·引言 | 第28页 |
| ·实验材料 | 第28-31页 |
| ·质粒与菌株 | 第28页 |
| ·培养基 | 第28-29页 |
| ·基因及引物合成 | 第29页 |
| ·抗生素 | 第29页 |
| ·试剂 | 第29-30页 |
| ·主要仪器设备 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-35页 |
| ·Plectasin 二硫键突变序列设计及合成 | 第31页 |
| ·重组表达载体电转化及阳性转化子筛选 | 第31-34页 |
| ·阳性转化子诱导表达 | 第34页 |
| ·蛋白纯化 | 第34页 |
| ·抑菌活性鉴定 | 第34-35页 |
| ·实验结果 | 第35-39页 |
| ·重组子的转化及阳性转化子的筛选 | 第35-36页 |
| ·阳性转化子的诱导表达 | 第36页 |
| ·表达产物纯化 | 第36-38页 |
| ·抑菌活性鉴定 | 第38-39页 |
| ·讨论与结论 | 第39-41页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| ·结论 | 第40-41页 |
| 第三章 PLECTASIN 在毕赤酵母中单体融合表达与纯化 | 第41-51页 |
| ·引言 | 第41页 |
| ·实验材料 | 第41-42页 |
| ·质粒与菌株 | 第41页 |
| ·培养基 | 第41页 |
| ·引物合成及DNA 测序 | 第41页 |
| ·抗生素 | 第41页 |
| ·试剂 | 第41-42页 |
| ·主要仪器设备 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-45页 |
| ·含甲酸或羟胺切点菌丝霉素基因序列设计、合成及其表达载体的构建 | 第42-43页 |
| ·重组表达载体pPICZαA | 第43-44页 |
| ·重组菌X-33(pPICZαA/PPD)和X-33(pPICZαA/PN)诱导表达 | 第44页 |
| ·融合蛋白的浓度测定 | 第44页 |
| ·融合蛋白纯化 | 第44页 |
| ·化学试剂切割融合蛋白 | 第44-45页 |
| ·抑菌活性鉴定 | 第45页 |
| ·实验结果 | 第45-49页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第45-46页 |
| ·重组子的转化及阳性转化子的筛选 | 第46页 |
| ·重组菌X-33(pPICZαA/PPD)和X-33(pPICZαA/PN)诱导表达 | 第46-47页 |
| ·融合蛋白分离纯化 | 第47-48页 |
| ·融合蛋白切割及抑菌活性鉴定 | 第48-49页 |
| ·讨论与结论 | 第49-51页 |
| ·讨论 | 第49页 |
| ·结论 | 第49-51页 |
| 第四章 PLECTASIN 多聚体构建及表达 | 第51-60页 |
| ·引言 | 第51页 |
| ·实验材料 | 第51-52页 |
| ·质粒与菌株 | 第51页 |
| ·培养基 | 第51页 |
| ·引物合成及DNA 测序 | 第51页 |
| ·抗生素 | 第51页 |
| ·试剂 | 第51-52页 |
| ·主要仪器设备 | 第52页 |
| ·实验方法 | 第52-56页 |
| ·Plectasin 多聚体重组载体构建 | 第52-53页 |
| ·重组克隆载体pPICZαA/PPD1, 2, 4 及pPICZαA/PN1, 2, 4 构建 | 第53-55页 |
| ·重组表达载体电转化及阳性转化子筛选 | 第55-56页 |
| ·重组菌X-33(pPICZαA/PPD1, 2, 4)和X-33(pPICZαA/PN1, 2, 4)诱导表达 | 第56页 |
| ·实验结果 | 第56-58页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第56-57页 |
| ·重组子的转化及阳性转化子的筛选 | 第57-58页 |
| ·菌丝霉素多聚体阳性转化子的诱导表达 | 第58页 |
| ·讨论与结论 | 第58-60页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| ·结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 作者简介 | 第67页 |
