| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略表(Abbreviation) | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| 1.1 猪传染性胃肠炎流行性病学 | 第12-13页 |
| 1.2 猪传染性胃肠炎病毒疫苗研究进展 | 第13-18页 |
| 1.2.1 常规疫苗 | 第13-14页 |
| 1.2.2 基因工程疫苗 | 第14-17页 |
| 1.2.3 TGEV基因工程疫苗存在的问题与展望 | 第17-18页 |
| 1.3 枯草芽孢杆菌表达系统的研究进展 | 第18-20页 |
| 1.4 两种不同表达方式的应用 | 第20-22页 |
| 1.4.1 细菌细胞表面展示与应用 | 第20-21页 |
| 1.4.2 细菌分泌表达的研究 | 第21-22页 |
| 1.5 免疫佐剂CpG-ODN和YT研究进展 | 第22-24页 |
| 1.5.1 佐剂CpG-ODN | 第23页 |
| 1.5.2 YT佐剂 | 第23-24页 |
| 第二章 目的与意义 | 第24-25页 |
| 第三章 材料和方法 | 第25-38页 |
| 3.1 材料 | 第25-29页 |
| 3.1.1 质粒、菌株 | 第25-27页 |
| 3.1.2 主要试剂与样品 | 第27页 |
| 3.1.3 主要的试验器材 | 第27-28页 |
| 3.1.4 主要的培养基及相关试剂的配制 | 第28-29页 |
| 3.1.5 引物 | 第29页 |
| 3.2 试验方法 | 第29-34页 |
| 3.2.1 TGEV多表位抗原基因的设计和合成 | 第29-30页 |
| 3.2.2 PCR扩增靶基因 | 第30-31页 |
| 3.2.3 PCR和酶切产物的电泳检测 | 第31页 |
| 3.2.4 限制性内切酶反应 | 第31页 |
| 3.2.5 PCR产物以及酶切产物回收与纯化 | 第31-32页 |
| 3.2.6 DNA片段与载体的连接 | 第32页 |
| 3.2.7 质粒的小量提取 | 第32-33页 |
| 3.2.8 大肠杆菌感受态细胞制备 | 第33页 |
| 3.2.9 连接产物转化 | 第33页 |
| 3.2.10 SDS-PAGE鉴定 | 第33-34页 |
| 3.3 重组枯草芽孢杆菌的构建 | 第34-35页 |
| 3.3.1 电转培养基的配制 | 第34页 |
| 3.3.2 枯草芽孢杆菌感受态的制备 | 第34页 |
| 3.3.3 枯草芽孢杆菌的电转化 | 第34-35页 |
| 3.3.4 重组菌株表达载体的构建以及重组菌的鉴定 | 第35页 |
| 3.4 重组菌株的生物学特性研究 | 第35-36页 |
| 3.4.1 重组菌株的蛋白表达 | 第35页 |
| 3.4.2 重组菌株生长特性的鉴定 | 第35页 |
| 3.4.3 重组菌的生化特性鉴定 | 第35页 |
| 3.4.4 重组菌株遗传稳定性的鉴定 | 第35页 |
| 3.4.5 电镜检验 | 第35-36页 |
| 3.5 ELISA方法的建立 | 第36-37页 |
| 3.5.1 阳性血清和阴性血清的制备 | 第36页 |
| 3.5.2 ELISA具体步骤 | 第36-37页 |
| 3.6 重组菌株的小鼠免疫试验 | 第37-38页 |
| 3.6.1 小鼠口服重组菌株试验 | 第37页 |
| 3.6.2 免疫小鼠抗体的采集 | 第37-38页 |
| 第四章 结果与分析 | 第38-50页 |
| 4.1 串联多拷贝载体的的构建与鉴定 | 第38-41页 |
| 4.1.1 串联多拷贝载体的构建 | 第38-40页 |
| 4.1.2 重组质粒的PCR和酶切鉴定 | 第40-41页 |
| 4.2 菌体表面展示表达载体的构建 | 第41-43页 |
| 4.2.1 重组菌株的表达 | 第41-42页 |
| 4.2.2 重组菌株的间接免疫荧光试验 | 第42-43页 |
| 4.3 分泌表达重组菌的构建与表达 | 第43-44页 |
| 4.3.1 分泌表达重组菌构建 | 第43-44页 |
| 4.3.2 重组菌的表达 | 第44页 |
| 4.4 重组菌株的遗传稳定性 | 第44-45页 |
| 4.5 重组菌株的生长特性鉴定 | 第45页 |
| 4.6 重组菌株的生化特性 | 第45-46页 |
| 4.7 重组菌株和亲本菌形态学观察 | 第46-47页 |
| 4.8 免疫小鼠的免疫原性测定 | 第47-50页 |
| 4.8.1 分泌表达重组菌株的蛋白分析 | 第47页 |
| 4.8.2 小鼠口服重组菌后血清中特异性抗体的检测 | 第47-48页 |
| 4.8.3 小鼠口服重组菌后肠黏膜中特异性抗体的检测 | 第48-49页 |
| 4.8.4 小鼠粪便中特异性抗体检测 | 第49-50页 |
| 第五章 讨论 | 第50-54页 |
| 5.1 TGEV基因工程口服疫苗的必要性 | 第50页 |
| 5.2 多表位抗原基因SN的设计与合成 | 第50-51页 |
| 5.3 枯草芽孢杆菌表达系统 | 第51-52页 |
| 5.4 重组菌对小鼠的免疫实验 | 第52页 |
| 5.5 佐剂CPG-OND和YT对口服动物免疫的影响 | 第52-54页 |
| 第六章 结语 | 第54-55页 |
| 6.1 结论 | 第54页 |
| 6.2 创新与存在的问题 | 第54-55页 |
| 6.2.1 创新点 | 第54页 |
| 6.2.2 存在的问题 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
