| 中文摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3页 |
| 中文文摘 | 第4-11页 |
| 绪论 | 第11-27页 |
| 1 微生物次级代谢产物 | 第11-12页 |
| 1.1 微生物次级代谢产物简介 | 第11页 |
| 1.2 微生物次级代谢产物研究进展 | 第11-12页 |
| 2 聚酮类抗生素 | 第12-18页 |
| 2.1 聚酮类化合物的药物应用 | 第13-14页 |
| 2.2 聚酮类化合物的分类 | 第14-18页 |
| 3 多环氧杂蒽酮类抗生素 | 第18-21页 |
| 3.1 Albofungin | 第18页 |
| 3.2 Lysolipin | 第18-19页 |
| 3.3 Simaomicin a | 第19页 |
| 3.4 Kigamycin | 第19页 |
| 3.5 Citreamicin | 第19-20页 |
| 3.6 Xantholipin | 第20-21页 |
| 4 Simaomicin a应用 | 第21-27页 |
| 4.1 simaomicin a的抑菌活性 | 第21-22页 |
| 4.2 Simaomicin a的抗鸡球虫病生物学活性 | 第22-23页 |
| 4.3 Simaomicin a特异性识别并诱导G1阶段的肿瘤细胞凋亡 | 第23-24页 |
| 4.4 Simaomicin a选择性破坏G2检查点 | 第24页 |
| 4.5 Simaomicin a的抗疟疾生物学活性 | 第24-27页 |
| 第一章 Nonomuraea sp.FIM 02-765的培养和发酵产物分析 | 第27-35页 |
| 1.1 实验材料 | 第27页 |
| 1.1.1 菌种 | 第27页 |
| 1.1.2 培养基及化学试剂 | 第27页 |
| 1.2 实验方法 | 第27-30页 |
| 1.2.1 菌种的保藏 | 第27页 |
| 1.2.2 高效液相色谱(HPLC)使用说明 | 第27-30页 |
| 1.2.3 液相色谱-质谱连用(HPLC-MS)方法分析 | 第30页 |
| 1.3 实验结果分析 | 第30-35页 |
| 1.3.1 Nonomuraea sp.FIM 02-765的培养 | 第30-31页 |
| 1.3.2 发酵产物的检测 | 第31-35页 |
| 第二章 Nonomuraea sp.FIM 02-765的基因组文库的构建 | 第35-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第35-36页 |
| 2.1.1 菌种 | 第35页 |
| 2.1.2 DNA质粒 | 第35页 |
| 2.1.3 培养基及化学试剂 | 第35-36页 |
| 2.2 实验方法 | 第36-38页 |
| 2.2.1 碱裂解法提取大肠杆菌质粒DNA | 第36-37页 |
| 2.2.2 Nonomuraea sp.FIM 02-765总DNA提取 | 第37页 |
| 2.2.3 低熔点琼脂糖凝胶的回收 | 第37页 |
| 2.2.4 Fosmid克隆的包装与滴度测定 | 第37-38页 |
| 2.2.5 DNA浓度的测量方法 | 第38页 |
| 2.3 实验结果及分析 | 第38-45页 |
| 2.3.1 Nonomuraea sp.FIM 02-765总DNA的提取 | 第38-39页 |
| 2.3.2 科斯质粒载体pJT2554的准备 | 第39-41页 |
| 2.3.4 插入DNA片段的准备 | 第41-42页 |
| 2.3.5 基因组cosmid质粒文库的构建 | 第42-45页 |
| 第三章 Simaomicin α生物合成基因簇的克隆 | 第45-59页 |
| 3.1 实验材料 | 第45-46页 |
| 3.1.1 菌种 | 第45页 |
| 3.1.2 质粒 | 第45页 |
| 3.1.3 培养基及生化试剂 | 第45-46页 |
| 3.2 实验方法 | 第46-49页 |
| 3.2.1 简并引物的设计 | 第46页 |
| 3.2.2 生物信息学分析 | 第46-47页 |
| 3.2.3 southern杂交印记 | 第47-48页 |
| 3.2.4 DNA片段的纯化回收(琼脂糖凝胶DNA片段回收试剂盒的使用) | 第48-49页 |
| 3.3 实验结果 | 第49-59页 |
| 3.3.1 基因组文库筛选探针的获取 | 第49-50页 |
| 3.3.2 Nonomuraea sp.基因组文库的筛选 | 第50-52页 |
| 3.3.3 southern杂交分析 | 第52-54页 |
| 3.3.4 simaomicin a聚酮合酶基因clf的获取 | 第54-59页 |
| 第四章 simaomicin a生物合成基因簇异源表达 | 第59-67页 |
| 4.1 实验材料 | 第59-60页 |
| 4.1.1 菌株 | 第59页 |
| 4.1.2 培养基与生化试剂 | 第59-60页 |
| 4.2 实验方法 | 第60-61页 |
| 4.2.1 S.lividans K4原生质体制备 | 第60页 |
| 4.2.2 少量质粒提取试剂盒的使用方法 | 第60-61页 |
| 4.2.3 原生质体转化步骤 | 第61页 |
| 4.3 实验结果 | 第61-67页 |
| 4.3.1 S.lividans K4异源表达体系的构建 | 第61-63页 |
| 4.3.2 异源表达菌株Simaomicin a产量检测 | 第63-67页 |
| 第五章 Simaomicin a基因敲除突变株的构建 | 第67-79页 |
| 5.1 实验材料 | 第67-68页 |
| 5.1.1 菌株 | 第67页 |
| 5.1.2 质粒 | 第67页 |
| 5.1.3 培养基及生化试剂 | 第67-68页 |
| 5.2 实验方法 | 第68-71页 |
| 5.2.1 碱裂解法少量提取质粒 | 第68页 |
| 5.2.2 钙转感受态的制备与转化 | 第68-69页 |
| 5.2.3 E.coli BW25113/pIJ790电转感受态的制备与转化 | 第69-70页 |
| 5.2.4 两异源亲本杂交介导的DNA质粒的跨属转移(接合转移) | 第70-71页 |
| 5.3 实验结果 | 第71-79页 |
| 5.3.1 基因置换载体pyh28构建 | 第71-78页 |
| 5.3.2 CLF基因置换突变株的构建和筛选 | 第78-79页 |
| 第六章 Simaomicin α生物合成基因簇的ORF预测及生物合成途径的推导 | 第79-89页 |
| 6.1 实验方法 | 第79页 |
| 6.2 实验结果 | 第79-89页 |
| 6.2.1 开放阅读框的预测 | 第79-87页 |
| 6.2.2 simaomicin α生物合成途径推导 | 第87-89页 |
| 总结与讨论 | 第89-93页 |
| 参考文献 | 第93-99页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第99-101页 |
| 致谢 | 第101-103页 |
| 个人简历 | 第103-105页 |
