| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩略词 | 第7-11页 |
| 1 前言 | 第11-16页 |
| 1.1 大肠杆菌简介 | 第11页 |
| 1.2 沙门氏菌简介 | 第11-12页 |
| 1.3 噬菌体及噬菌体治疗 | 第12-13页 |
| 1.4 噬菌体裂解酶及裂解酶治疗 | 第13-15页 |
| 1.5 本研究目的与意义 | 第15-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-29页 |
| 2.1 试验材料 | 第16-18页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第16页 |
| 2.1.2 主要试剂与药品 | 第16-17页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第17-18页 |
| 2.2 噬菌体的分离、鉴定及部分生物学特性分析 | 第18-19页 |
| 2.2.1 噬菌体的分离纯化 | 第18页 |
| 2.2.2 噬菌体形态的电镜观察 | 第18页 |
| 2.2.3 噬菌体悬液效价的测定 | 第18-19页 |
| 2.2.4 噬菌体ECGD1的最佳感染复数的测定 | 第19页 |
| 2.2.5 噬菌体宿主范围的测定 | 第19页 |
| 2.3 噬菌体ECGD1的基因组学分析 | 第19-22页 |
| 2.3.1 噬菌体扩繁浓缩及基因组的提取 | 第19-20页 |
| 2.3.2 噬菌体全基因组测序 | 第20页 |
| 2.3.3 噬菌体功能基因组学分析 | 第20-21页 |
| 2.3.4 裂解酶基因编码蛋白的结构预测 | 第21-22页 |
| 2.4 噬菌体ECGD1裂解酶lysin的表达及活性鉴定 | 第22-29页 |
| 2.4.1 裂解酶基因lysin的引物设计和基因扩增 | 第22页 |
| 2.4.2 裂解酶基因PCR产物回收 | 第22-23页 |
| 2.4.3 裂解酶基因PCR产物与pET-32a的双酶切 | 第23页 |
| 2.4.4 裂解酶基因PCR产物与pET-32a的双酶切产物的连接 | 第23-24页 |
| 2.4.5 重组质粒pET-32a-lysin的制备 | 第24-25页 |
| 2.4.6 重组质粒pET-32a-lysin转化BL21（DE3）感受态细胞 | 第25页 |
| 2.4.7 目的蛋白的诱导表达 | 第25页 |
| 2.4.8 表达产物的SDS-PAGE分析 | 第25-26页 |
| 2.4.9 目的蛋白的纯化及浓度测定 | 第26-27页 |
| 2.4.10 表达产物裂解活性的检测 | 第27-28页 |
| 2.4.10.1 菌内裂解活性的检测 | 第27页 |
| 2.4.10.2 菌外裂解活性的检测 | 第27-28页 |
| 2.4.11 表达产物裂解谱的测定 | 第28页 |
| 2.4.12 多粘菌素B与重组蛋白联用裂解活菌 | 第28-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-57页 |
| 3.1 噬菌体分离、鉴定及部分生物学特性 | 第29-32页 |
| 3.1.1 噬菌体分离 | 第29页 |
| 3.1.2 噬菌体ECGD1的形态 | 第29-30页 |
| 3.1.3 噬菌体ECGD1效价测定 | 第30-31页 |
| 3.1.4 噬菌体ECGD1的最佳感染复数（MOI） | 第31页 |
| 3.1.5 噬菌体ECGD1的宿主范围 | 第31-32页 |
| 3.2 噬菌体ECGD1全基因组序列测定及分析 | 第32-48页 |
| 3.2.1 噬菌体基因组一般特性分析 | 第32页 |
| 3.2.2 噬菌体基因组tRNA分析 | 第32-33页 |
| 3.2.3 噬菌体基因组基因预测与功能注释 | 第33-44页 |
| 3.2.3.1 核苷酸代谢/DNA复制/重组相关基因 | 第34-43页 |
| 3.2.3.2 基因组包装相关基因 | 第43页 |
| 3.2.3.3 结构蛋白基因 | 第43页 |
| 3.2.3.4 裂解基因 | 第43页 |
| 3.2.3.5 其它功能基因 | 第43页 |
| 3.2.3.6 有害基因筛查结果 | 第43-44页 |
| 3.2.4 噬菌体基因组比较分析 | 第44-45页 |
| 3.2.5 裂解酶基因编码蛋白的结构预测结果 | 第45-48页 |
| 3.2.5.1 结构域预测 | 第45页 |
| 3.2.5.2 跨膜区域预测 | 第45-46页 |
| 3.2.5.3 信号肽预测 | 第46-47页 |
| 3.2.5.4 二级结构预测结果 | 第47页 |
| 3.2.5.5 三级结构预测结果 | 第47-48页 |
| 3.3 噬菌体ECGD1裂解酶lysin的表达及活性鉴定 | 第48-57页 |
| 3.3.1 裂解酶基因lysin的PCR扩增及重组质粒的鉴定 | 第48-49页 |
| 3.3.2 裂解酶lysin诱导表达的SDS-PAGE分析 | 第49-51页 |
| 3.3.3 裂解酶lysin纯化 | 第51页 |
| 3.3.4 裂解酶lysin裂解活性鉴定 | 第51-54页 |
| 3.3.4.1 裂解酶lysin菌内裂解活性检测 | 第51-52页 |
| 3.3.4.2 裂解酶lysin菌外裂解活性检测 | 第52-54页 |
| 3.3.5 裂解酶lysin裂解谱测定 | 第54-56页 |
| 3.3.6 裂解酶lysin与多粘菌素B协同作用效果 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-63页 |
| 4.1 噬菌体生物学特性的探讨 | 第57-58页 |
| 4.2 噬菌体基因组学探讨 | 第58-60页 |
| 4.3 裂解酶表达的探讨 | 第60-61页 |
| 4.4 裂解酶活性鉴定的探讨 | 第61-62页 |
| 4.5 裂解酶与多粘菌素B协同作用的探讨 | 第62-63页 |
| 5 结论 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 硕士期间所获奖励与发表文章 | 第70页 |
