| 摘要 | 第2-3页 |
| abstract | 第3-4页 |
| 常用缩略词 | 第5-10页 |
| 1 前言 | 第10-18页 |
| 1.1 抗菌肽的研究进展 | 第10-12页 |
| 1.1.1 抗菌肽的分类 | 第10-11页 |
| 1.1.2 抗菌肽的分子结构 | 第11页 |
| 1.1.3 抗菌肽的作用机制 | 第11页 |
| 1.1.4 抗菌肽在生物医药及畜牧业中的应用 | 第11-12页 |
| 1.2 哺乳动物抗菌肽的研究进展 | 第12-16页 |
| 1.2.1 cathelicidins抗菌肽 | 第12-14页 |
| 1.2.2 defensins抗菌肽 | 第14-16页 |
| 1.3 猪源抗菌肽PR39的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.3.1 抗菌肽PR39的分子结构特点 | 第16页 |
| 1.3.2 抗菌肽PR39的作用机制 | 第16页 |
| 1.3.3 抗菌肽PR39的抗菌作用 | 第16-17页 |
| 1.4 通过转基因表达抗菌肽提高动物抗病力的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.5 研究目的及意义 | 第18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-41页 |
| 2.1 技术路线 | 第18页 |
| 2.2 实验材料 | 第18-22页 |
| 2.2.1 实验动物 | 第18-19页 |
| 2.2.2 质粒、菌株和细胞 | 第19页 |
| 2.2.3 主要试剂及耗材 | 第19-20页 |
| 2.2.4 主要培养基和试剂的配制 | 第20-21页 |
| 2.2.5 主要试验仪器 | 第21-22页 |
| 2.2.6 数据分析及图片处理软件 | 第22页 |
| 2.3 载体pCMS-EGFP-PR39的构建 | 第22-25页 |
| 2.3.1 PR39基因的合成 | 第23页 |
| 2.3.2 真核表达载体pCMS-EGFP的酶切 | 第23-24页 |
| 2.3.3 PR39基因的酶切 | 第24页 |
| 2.3.4 酶切后载体pCMS-EGFP与-PR39的连接与转化 | 第24-25页 |
| 2.3.5 PCR和测序鉴定 | 第25页 |
| 2.4 载体pCMS-EGFP-PR39的功能验证 | 第25-29页 |
| 2.4.1 质粒转染293细胞 | 第25-26页 |
| 2.4.2 质粒转染293细胞后PR39基因的在mRNA水平上的表达检测 | 第26-28页 |
| 2.4.3 质粒转染293细胞后对大肠杆菌抑制效果的检测 | 第28-29页 |
| 2.5 F0代转PR39基因小鼠的制备和鉴定 | 第29-31页 |
| 2.5.1 F0代转PR39基因小鼠的PCR鉴定 | 第29页 |
| 2.5.2 F0代转PR39基因小鼠EGFP荧光表达检测 | 第29-30页 |
| 2.5.3 F0代转PR39基因小鼠的qPCR检测 | 第30页 |
| 2.5.4 F0代转PR39基因小鼠EGFP基因拷贝数检测 | 第30-31页 |
| 2.6 F1代转PR39基因小鼠的制备鉴定及检测 | 第31-34页 |
| 2.6.1 F1代转PR39基因小鼠的PCR鉴定 | 第32页 |
| 2.6.2 F1代转基因小鼠不同组织PR39mRNA相对表达量的检测 | 第32页 |
| 2.6.3 使用ELISA方法对F1代转PR39基因小鼠PR39蛋白浓度的检测 | 第32-34页 |
| 2.6.4 F1代转PR39基因小鼠EGFP蛋白表达检测 | 第34页 |
| 2.7 F1代小鼠的生长性能检测 | 第34页 |
| 2.8 F1代小鼠感染APP剂量的摸索 | 第34-36页 |
| 2.8.1 胸膜肺炎放线杆菌生长曲线的测定 | 第34-35页 |
| 2.8.2 胸膜肺炎放线杆菌浓度对应OD值检测分析 | 第35页 |
| 2.8.3 野生型小鼠感染APP剂量的设定 | 第35-36页 |
| 2.9 F1代转PR39基因小鼠抗细菌能力检测 | 第36-41页 |
| 2.9.1 小鼠感染猪胸膜肺炎放线杆菌实验 | 第36页 |
| 2.9.2 攻毒后小鼠死亡情况的统计 | 第36页 |
| 2.9.3 攻毒后小鼠血常规检测 | 第36页 |
| 2.9.4 攻毒后小鼠组织细菌含量检测 | 第36-37页 |
| 2.9.5 F1代小鼠感染APP后各组织病理症状检测 | 第37-40页 |
| 2.9.6 F1代小鼠感染APP后各组织感染细菌的检测 | 第40-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-60页 |
| 3.1 载体pCMS-EGFP-PR39的构建及功能验证 | 第41-44页 |
| 3.1.1 载体pCMS-EGFP-PR39的构建 | 第41-42页 |
| 3.1.2 载体pCMS-EGFP-PR39在体外细胞中的表达验证 | 第42-43页 |
| 3.1.3 载体pCMS-EGFP-PR39在体外细胞中表达的抗菌肽功能验证 | 第43-44页 |
| 3.2 转基因小鼠的制备、鉴定及分析 | 第44-51页 |
| 3.2.1 F0代转基因小鼠的制备 | 第44-45页 |
| 3.2.2 F0代转基因小鼠的PCR鉴定 | 第45页 |
| 3.2.3 F0代转基因小鼠携带的外源基因拷贝数分析 | 第45-46页 |
| 3.2.4 F0代转基因小鼠EGFP和PR39基因表达量检测 | 第46-47页 |
| 3.2.5 F1代转基因小鼠的鉴定 | 第47-48页 |
| 3.2.6 F1代转基因小鼠不同组织PR39基因mRNA相对表达量检测 | 第48-49页 |
| 3.2.7 F1代转基因小鼠不同组织PR39蛋白含量检测 | 第49-50页 |
| 3.2.8 F1代转基因小鼠与非转基因小鼠生长性能比较 | 第50-51页 |
| 3.3 转基因小鼠抗细菌（APP）感染能力分析 | 第51-60页 |
| 3.3.1 APP体外生长曲线分析 | 第51页 |
| 3.3.2 APP浓度对应OD值检测分析 | 第51-52页 |
| 3.3.3 小鼠APP攻毒剂量的探索 | 第52-53页 |
| 3.3.4 F1代小鼠感染APP后死亡率的统计分析 | 第53页 |
| 3.3.5 F1代小鼠感染APP后 5h存活小鼠的血常规、组织细菌含量及组织病理学分析 | 第53-55页 |
| 3.3.6 F1代小鼠感染APP后 5-17h死亡小鼠组织细菌含量及组织病理学分析 | 第55-57页 |
| 3.3.7 F1代小鼠感染APP后 24h存活小鼠的组织细菌含量及组织病理学分析 | 第57-59页 |
| 3.3.8 F1代小鼠组织感染细菌的鉴定 | 第59-60页 |
| 4 讨论 | 第60-64页 |
| 4.1 抗菌肽在转基因动物中抑菌效果的差异 | 第60-62页 |
| 4.1.1 抗菌肽对转基因动物感染细菌后死亡率的影响 | 第60-61页 |
| 4.1.2 抗菌肽对转基因动物感染细菌后血常规的影响 | 第61页 |
| 4.1.3 抗菌肽对转基因动物感染细菌后组织细菌含量的影响 | 第61-62页 |
| 4.1.4 抗菌肽对转基因动物感染细菌后的组织病理学影响 | 第62页 |
| 4.2 抗菌肽对动物生长性能的影响 | 第62页 |
| 4.3 小鼠细菌攻毒方案的设计 | 第62-64页 |
| 4.3.1 小鼠攻毒实验所需菌种的选择 | 第63页 |
| 4.3.2 小鼠攻毒实验所用小鼠的选择 | 第63页 |
| 4.3.3 小鼠攻毒实验中攻毒方式的选择 | 第63页 |
| 4.3.4 小鼠攻毒实验中攻毒剂量的选择 | 第63-64页 |
| 5 结论 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
