| Abstract | 第4-5页 |
| 摘要 | 第6-11页 |
| Chapter 1 Introduction | 第11-18页 |
| 1.1 The study background and significance | 第11-13页 |
| 1.2 Latest development in Synthetic Biology | 第13-14页 |
| 1.3 Biosensors and Boolean gates | 第14-15页 |
| 1.4 Activated prooters as component of Boolean gates | 第15-16页 |
| 1.5 Main research content and goal | 第16-17页 |
| 1.6 Technology roadmap | 第17-18页 |
| Chapter 2 Experiment materials and methods | 第18-31页 |
| 2.1 Laboratory equipments | 第18页 |
| 2.2 Reagents and materials | 第18-19页 |
| 2.3 Experimental methods | 第19-31页 |
| 2.3.1 Bacterial transformation | 第19-20页 |
| 2.3.2 Colony picking | 第20-21页 |
| 2.3.3 Mini preparation | 第21-22页 |
| 2.3.4 Restriction digest | 第22-23页 |
| 2.3.5 Gel electrophoresis | 第23页 |
| 2.3.6 DNA elution | 第23-24页 |
| 2.3.7 Gibson Assembly (One-step isothermal DNA assembly) | 第24-25页 |
| 2.3.8 MoClo Assembly (For 0-module plasmids) | 第25-26页 |
| 2.3.9 MoClo Assembly (For 1-module plasmids) | 第26-27页 |
| 2.3.10 Yeast transformation | 第27-28页 |
| 2.3.11 Yeast cells streaking and culture | 第28-29页 |
| 2.3.12 DNA extraction from yeast cells | 第29页 |
| 2.3.13 Yeast cells induction | 第29-31页 |
| Chapter 3 DNA assembly | 第31-41页 |
| 3.1 Theory of Gibson method | 第31-32页 |
| 3.2 Theory of MoClo method | 第32-35页 |
| 3.3 Adapting the MoClo method to yeast cells | 第35-36页 |
| 3.4 New 1-level acceptor vector construction | 第36-38页 |
| 3.5 New 2-level acceptor vector construction | 第38-40页 |
| 3.6 Brief summary | 第40-41页 |
| Chapter 4 Activated promoter construction | 第41-51页 |
| 4.1 Constructing a weak promoter | 第41-43页 |
| 4.2 AraC-based activators | 第43-44页 |
| 4.3 TetR'-based activators | 第44-45页 |
| 4.4 MoClo assembly for activated promoters | 第45-50页 |
| 4.4.1 Operator cassettes into 0-modules | 第45-46页 |
| 4.4.2 Operator cassettes into 1-modules | 第46页 |
| 4.4.3 Final construction into a 2-modules | 第46-50页 |
| 4.5 Brief summary | 第50-51页 |
| Chapter 5 Constructing promoters activated by tetracycline and β-estradiol | 第51-56页 |
| 5.1 LexA-based activator and lex operator cassettes | 第51-52页 |
| 5.2 Cassettes of mixed tet operators and lex operators | 第52-53页 |
| 5.3 TetR' induction with tetracycline | 第53-54页 |
| 5.4 LexA induction with β-estradiol | 第54-55页 |
| 5.5 Brief summary | 第55-56页 |
| Conclusion | 第56-58页 |
| References | 第58-64页 |
| Acknowledgements | 第64页 |
