| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略语表 | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-21页 |
| 1.1 小RNA(Small RNA)概述 | 第9-10页 |
| 1.2 miRNA | 第10-15页 |
| 1.2.1 miRNA的发现 | 第10-11页 |
| 1.2.2 miRNA的生物合成 | 第11-12页 |
| 1.2.3 miRNA的作用机制 | 第12-13页 |
| 1.2.4 植物miRNA调控的主要靶标 | 第13-14页 |
| 1.2.5 植物miRNA的功能 | 第14-15页 |
| 1.2.5.1 miRNA与植物的生长发育 | 第14页 |
| 1.2.5.2 miRNA参与植物的激素应答和信号转导 | 第14-15页 |
| 1.2.5.3 miRNA与植物代谢以及胁迫应答调控 | 第15页 |
| 1.3 转录因子 | 第15-19页 |
| 1.3.1 HD-Zip转录因子概述 | 第15-16页 |
| 1.3.2 HD-ZipⅢ转录因子 | 第16-17页 |
| 1.3.3 ami RNA技术 | 第17-19页 |
| 1.3.3.1 amiRNA技术在植物育种和抗非生物胁迫方面的应用 | 第17-19页 |
| 1.3.3.2 miR166/HD-ZipⅢ的研究现状 | 第19页 |
| 1.4 全文总体研究路线 | 第19页 |
| 1.5 本研究的目的意义 | 第19-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-32页 |
| 2.1 材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第21页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第21页 |
| 2.1.3 工具酶和试剂 | 第21页 |
| 2.1.4 仪器设备 | 第21-22页 |
| 2.2 方法 | 第22-32页 |
| 2.2.1 生物信息学分析 | 第22页 |
| 2.2.2 马铃薯的胁迫处理 | 第22页 |
| 2.2.3 RNA提取和cDNA合成 | 第22页 |
| 2.2.4 StHB14/15和StREV cDNA的克隆 | 第22-23页 |
| 2.2.4.1 回收片段与克隆载体连接 | 第23页 |
| 2.2.4.2 连接产物的转化 | 第23页 |
| 2.2.4.3 阳性克隆的检测及测序 | 第23页 |
| 2.2.5 RLM-RACE验证miRNA靶基因切割位点 | 第23-25页 |
| 2.2.6 马铃薯miR166b/ StHB14/15和StREV的表达量分析 | 第25-27页 |
| 2.2.6.1 miR166b组织表达特异性分析 | 第25-26页 |
| 2.2.6.2 StHB14/15和StREV的qRT-PCR表达分析 | 第26-27页 |
| 2.2.7 miR166植物表达载体的构建及鉴定 | 第27-29页 |
| 2.2.7.1 amiRNA的产生 | 第27-28页 |
| 2.2.7.2 miR166植物表达载体的构建 | 第28-29页 |
| 2.2.7.3 植物表达载体的PCR和酶切鉴定 | 第29页 |
| 2.2.8 农杆菌工程菌液的制备 | 第29-30页 |
| 2.2.8.1 农杆菌LBA4404感受态细胞的制备 | 第29页 |
| 2.2.8.2 根癌农杆菌感受态细胞的冻融法转化 | 第29-30页 |
| 2.2.9 马铃薯转基因植株的获得 | 第30-31页 |
| 2.2.9.1 马铃薯试管薯的诱导 | 第30页 |
| 2.2.9.2 根癌农杆菌介导的马铃薯试管薯转化 | 第30-31页 |
| 2.2.10 转基因马铃薯株系PCR检测 | 第31页 |
| 2.2.11 转基因植株形态学指标测定 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-50页 |
| 3.1 stu-miR166家族生物信息学分析 | 第32-33页 |
| 3.2 stu-miR166b靶基因的预测 | 第33-34页 |
| 3.3 StHB14/StHB15、StREV的克隆 | 第34页 |
| 3.4 StHB14/StHB15、StREV的RLM-RACE验证 | 第34-35页 |
| 3.5 miR166b靶基因的生物信息学分析 | 第35-41页 |
| 3.5.1 StHB14/15和StREV跨膜结构域预测 | 第38-39页 |
| 3.5.2 StHB14/15和StREV翻译后氨基酸加工修饰的预测 | 第39页 |
| 3.5.3 StHB14/15和StREV信号肽的预测 | 第39-40页 |
| 3.5.4 StHB14/15和StREV疏水性预测 | 第40-41页 |
| 3.6 stu-miR166b和StHB14/StHB15、StREV组织特异性表达分析 | 第41-42页 |
| 3.6.1 stu-miR166b组织特异性表达分析 | 第41页 |
| 3.6.2 StHB14/15和StREV组织特异性表达分析 | 第41-42页 |
| 3.7 stu-miR166b和StHB14/StHB15、StREV响应胁迫的表达模式分析 | 第42-45页 |
| 3.7.1 stu-miR166b在马铃薯地上部分响应胁迫的表达模式 | 第42-43页 |
| 3.7.2 stu-miR166b在马铃薯地下部分响应胁迫的表达模式 | 第43-44页 |
| 3.7.3 StHB14/15和StREV在地上部分响应胁迫的表达模式 | 第44页 |
| 3.7.4 StHB14/15和StREV在地下部分响应胁迫的表达模式 | 第44-45页 |
| 3.8 人工amiR166b表达载体的获得 | 第45-47页 |
| 3.9 转基因马铃薯植株的PCR检测 | 第47-48页 |
| 3.10 StHB14/15、StREV的转录分析 | 第48-49页 |
| 3.11 T0转基因植株的表型观测 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-52页 |
| 5 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 作者简介 | 第60-61页 |
| 导师简介 | 第61-63页 |
| 附录 | 第63-65页 |
