| 致谢 | 第5-7页 |
| 摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 符号与缩略词表 | 第13-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-44页 |
| 1.1 γ-氨基丁酸概述 | 第18-24页 |
| 1.1.1 γ-氨基丁酸的结构与性质 | 第18-19页 |
| 1.1.2 GABA生理功能 | 第19-21页 |
| 1.1.3 GABA的应用 | 第21-24页 |
| 1.2 GABA的制备方法 | 第24-31页 |
| 1.2.1 化学合成法 | 第24页 |
| 1.2.2 生物转化法 | 第24-31页 |
| 1.3 细菌合成GABA的机制和影响因素 | 第31-34页 |
| 1.3.1 细菌合成GABA的机制 | 第31-32页 |
| 1.3.2 细菌GABA合成系统的关键酶-GAD和Glu-GABA反向转运蛋白 | 第32-33页 |
| 1.3.3 细菌合成GABA的主要影响因素 | 第33-34页 |
| 1.4 微生物透性化技术 | 第34-40页 |
| 1.4.1 透性化试剂处理法 | 第36页 |
| 1.4.2 物理处理法 | 第36-39页 |
| 1.4.3 分子生物学法 | 第39-40页 |
| 1.5 乳酸发酵中酸抑制效应的消除方法 | 第40-41页 |
| 1.6 论文研究目的与主要内容 | 第41-44页 |
| 第二章 Lactobacillus brevis CGMCC NO.1306合成GABA能力的强化研究 | 第44-70页 |
| 2.1 前言 | 第44-45页 |
| 2.2 材料与方法 | 第45-56页 |
| 2.2.1 菌种和质粒 | 第45页 |
| 2.2.2 试剂 | 第45页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第45-46页 |
| 2.2.4 培养基 | 第46页 |
| 2.2.5 短乳杆菌GABA发酵条件 | 第46-47页 |
| 2.2.6 GAD抗酸系统相关操纵子的克隆 | 第47-49页 |
| 2.2.7 荧光定量PCR测定目的基因的转录情况 | 第49-51页 |
| 2.2.8 重组短乳杆菌的构建 | 第51-55页 |
| 2.2.9 菌体GABA合成能力的测定 | 第55页 |
| 2.2.10 分析测试方法 | 第55-56页 |
| 2.3 结果和讨论 | 第56-69页 |
| 2.3.1 GAD抗酸系统相关操纵子的克隆 | 第56-61页 |
| 2.3.2 Lb.brevis CGMCC NO.1306 GAD抗酸系统相关基因在发酵过程中的表达情况 | 第61-64页 |
| 2.3.3 Lb.brevis CGMCC NO.1306(pMG36e-gadRCA)的构建 | 第64-66页 |
| 2.3.4 gadRCA操纵子拷贝数增加对Lb.brevis CGMCC NO.1306 GABA合成能力的影响 | 第66-69页 |
| 2.4 本章小结 | 第69-70页 |
| 第三章 过量表达Glu-GABA反向转运蛋白对GAD工程菌BL21(DE3)-pET28a-gadB表观催化活力的影响 | 第70-82页 |
| 3.1 前言 | 第70-71页 |
| 3.2 材料与方法 | 第71-73页 |
| 3.2.1 菌种和质粒 | 第71页 |
| 3.2.2 试剂 | 第71页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第71页 |
| 3.2.4 培养基 | 第71页 |
| 3.2.5 重组大肠杆菌的构建 | 第71-72页 |
| 3.2.6 重组大肠杆菌的诱导表达 | 第72页 |
| 3.2.7 菌体粗酶液的制备 | 第72页 |
| 3.2.8 菌体表观GAD活性的测定 | 第72页 |
| 3.2.9 分析测试方法 | 第72-73页 |
| 3.3 结果和讨论 | 第73-80页 |
| 3.3.1 重组表达载体pET28a-gadBC和pET28a-gadC的构建 | 第73-76页 |
| 3.3.2 Glu-GABA反向转运蛋白过量表达对BL21(DE3)-pET28a-gadB表观GAD催化活力的影响 | 第76-78页 |
| 3.3.3 Glu-GABA反向转运蛋白过量表达对BL21(DE3)-pET28a-gadB胞内GAD酶活的影响 | 第78-79页 |
| 3.3.4 不同诱导时机对BL21(DE3)-pET28a-gadBC表观GAD催化活力的影响 | 第79-80页 |
| 3.4 本章小结 | 第80-82页 |
| 第四章 应用透性化技术改善BL21(DE3)-pET28a-gadB菌体表观GAD催化活力 | 第82-104页 |
| 4.1 前言 | 第82页 |
| 4.2 材料与方法 | 第82-87页 |
| 4.2.1 菌种和质粒 | 第82-83页 |
| 4.2.2 试剂 | 第83页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第83页 |
| 4.2.4 培养基 | 第83页 |
| 4.2.5 重组大肠杆菌的诱导表达 | 第83页 |
| 4.2.6 BL21(DE3)-pET28a-gadB菌体的透性化处理 | 第83-86页 |
| 4.2.7 细胞粗酶液的制备 | 第86页 |
| 4.2.8 菌体GAD表观催化活力的测定 | 第86页 |
| 4.2.9 分析测试方法 | 第86-87页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第87-102页 |
| 4.3.1 有机溶剂对BL21(DE3)-pET28a-gadB的透性化处理 | 第87-90页 |
| 4.3.2 表面活性剂透性化对BL21(DE3)-pET28a-gadB的透性化处理 | 第90-92页 |
| 4.3.3 热处理对BL21(DE3)-pET28a-gadB的透性化处理 | 第92-94页 |
| 4.3.4 细胞壁合成抑制剂和干扰剂对BL21(DE3)-pET28a-gadB的透性化处理 | 第94-97页 |
| 4.3.5 麦芽糖-蛙皮素融合蛋白过量表达对BL21(DE3)-pET28a-gadB表观GAD催化活力的影响 | 第97-99页 |
| 4.3.6 透性化处理对菌体细胞形态的影响 | 第99-101页 |
| 4.3.7 BL21(DE3)-pET28a-gadB表观GAD催化活力改善方法的比较 | 第101-102页 |
| 4.4 本章小结 | 第102-104页 |
| 第五章 谷氨酸脱羧反应与乳酸发酵耦合制备GABA的研究 | 第104-120页 |
| 5.1 前言 | 第104-105页 |
| 5.2 材料与方法 | 第105-109页 |
| 5.2.1 菌种 | 第105页 |
| 5.2.2 试剂 | 第105-106页 |
| 5.2.3 仪器 | 第106页 |
| 5.2.4 培养基 | 第106页 |
| 5.2.5 重组大肠杆菌的诱导表达 | 第106页 |
| 5.2.6 透性化BL21(DE3)-pET28a-gadB菌体的制备 | 第106页 |
| 5.2.7 透性化BL21(DE3)-pET28a-gadB菌体的固定化 | 第106-107页 |
| 5.2.8 固定化体系稳定性的强化 | 第107页 |
| 5.2.9 固定化菌体催化活力的测定 | 第107-108页 |
| 5.2.10 谷氨酸脱羧反应与米根霉乳酸发酵耦合制备GABA | 第108页 |
| 5.2.11 分析测试方法 | 第108-109页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第109-118页 |
| 5.3.1 透性化BL21(DE3)-pET28a-gadB菌体的固定化 | 第109-114页 |
| 5.3.2 谷氨酸脱羧反应与米根霉乳酸发酵耦合制备GABA的研究 | 第114-118页 |
| 5.4 结论 | 第118-120页 |
| 第六章 结论与展望 | 第120-124页 |
| 6.1 结论 | 第120-122页 |
| 6.2 展望 | 第122-124页 |
| 参考文献 | 第124-142页 |
| 附录1 | 第142页 |
| 附录2 | 第142-143页 |
| 附录3 | 第143-144页 |
| 攻读博士学位期间科研成果 | 第144页 |
