| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-17页 |
| 1 生物体内丙酮醛降解途径的研究进展 | 第10-11页 |
| 1.1 丙酮醛对细胞的毒害作用 | 第10-11页 |
| 1.2 丙酮醛降解途径 | 第11页 |
| 2 乙二醛酶Ⅲ的研究进展 | 第11-12页 |
| 2.1 具有乙二醛酶Ⅲ活性的DJ-1蛋白 | 第12页 |
| 2.2 具有乙二醛酶Ⅲ活性的Hsp31蛋白 | 第12页 |
| 3 Spc1途径/Pap1途径参与应激的研究进展 | 第12-15页 |
| 3.1 Pap1途径参与应激 | 第12-13页 |
| 3.2 Spc1途径参与应激 | 第13-14页 |
| 3.3 Spc1途径/Pap1途径与丙酮醛 | 第14-15页 |
| 4 粟酒裂殖酵母研究背景简介 | 第15-17页 |
| 第二章 粟酒裂殖酵母spc1敲除突变株和atf1敲除突变株的构建 | 第17-29页 |
| 1 材料与方法 | 第17-23页 |
| 1.1 菌种、质粒与培养条件 | 第17-18页 |
| 1.2 试剂与仪器 | 第18-19页 |
| 1.3 引物设计 | 第19-21页 |
| 1.3.1 spc1敲除引物设计 | 第19-20页 |
| 1.3.2 atf1敲除引物设计 | 第20-21页 |
| 1.4 获取融合片段 | 第21-22页 |
| 1.5 粟酒裂殖酵母的醋酸锂转化 | 第22页 |
| 1.6 敲除菌株的鉴定 | 第22-23页 |
| 1.6.1 酵母基因组的提取 | 第22-23页 |
| 1.6.2 PCR鉴定敲除突变株 | 第23页 |
| 2 实验结果 | 第23-28页 |
| 2.1 spc1敲除菌株的获得 | 第23-26页 |
| 2.1.1 spc1上游同源臂、spcl下游同源臂和筛选标签ura4的扩增 | 第23-24页 |
| 2.1.2 融合PCR全长片段的扩增 | 第24-25页 |
| 2.1.3 酵母转化子的PCR验证 | 第25-26页 |
| 2.2 atf1敲除菌株的获得 | 第26-28页 |
| 2.2.1 atf1上游同源臂、atf1下游同源臂扩增 | 第26-27页 |
| 2.2.2 atf1融合PCR全长片段的扩增 | 第27-28页 |
| 2.2.3 酵母转化子的PCR验证 | 第28页 |
| 3 讨论 | 第28-29页 |
| 第三章 粟酒裂殖酵母spc1敲除突变株和pap1敲除突变株生长状况及细胞形态的研究 | 第29-33页 |
| 1 材料与方法 | 第29-30页 |
| 1.1 实验材料 | 第29页 |
| 1.2 野生型及突变株酵母细胞生长曲线及存活率的测定 | 第29页 |
| 1.3 野生型及突变株酵母细胞形态的观察 | 第29-30页 |
| 2 结果 | 第30-32页 |
| 2.1 spc1基因敲除和pap1基因敲除对细胞生长曲线及存活率的影响 | 第30-32页 |
| 2.2 spc1基因敲除和pap1基因敲除对细胞形态的影响 | 第32页 |
| 3 讨论 | 第32-33页 |
| 第四章 SpDJ-1、Hsp3101-Hsp3105各时期转录水平以及是否受Spc1-Atf1途径和Pap1途径调控的研究 | 第33-52页 |
| 1 材料与方法 | 第33-39页 |
| 1.1 实验材料 | 第33-34页 |
| 1.2 粟酒裂殖酵母yHL6381总RNA的提取 | 第34-35页 |
| 1.3 RNA的质量检测 | 第35页 |
| 1.4 cDNA的获得 | 第35-36页 |
| 1.5 Real-Time PCR | 第36页 |
| 1.6 荧光定量PCR引物设计 | 第36-37页 |
| 1.7 Real-Time PCR数据分析 | 第37页 |
| 1.8 酵母细胞蛋白的提取 | 第37页 |
| 1.9 蛋白浓度测定(BCA法) | 第37页 |
| 1.10 Western Blot | 第37-39页 |
| 2 结果 | 第39-51页 |
| 2.1 RNA的质量检测 | 第39-43页 |
| 2.1.1 WT菌株RNA的质量检测 | 第39-40页 |
| 2.1.2 突变体菌株RNA的质量检测 | 第40-43页 |
| 2.1.2.1 △spc1突变株RNA的质量检测 | 第40-43页 |
| 2.1.2.2 △pap1菌株、△atf1菌株、△glo1菌株RNA的质量检测 | 第43页 |
| 2.2 WT菌株各生长时期SpDJ-1以及Hsp3101-Hsp3105的转录水平 | 第43-44页 |
| 2.3 △spc1菌株各生长时期SpDJ-1以及Hsp3101-Hsp3105的转录水平 | 第44-45页 |
| 2.4 △atf1菌株各生长时期SpDJ-1以及Hsp3101-Hsp3105的转录水平 | 第45-48页 |
| 2.5 △pap1菌株各生长时期SpDJ-1以及Hsp3101-Hsp3105的转录水平 | 第48-50页 |
| 2.6 与WT菌株相比,△spc1、△atf1、△pap1菌株稳定期时Hsp3101蛋白水平的变化 | 第50-51页 |
| 3 讨论 | 第51-52页 |
| 第五章 MG刺激对SpDJ-1、Hsp3101和Hsp3102的表达及其调控的研究 | 第52-60页 |
| 1 材料与方法 | 第52-55页 |
| 1.1 实验材料 | 第52页 |
| 1.2 MG刺激不同的酵母细胞 | 第52页 |
| 1.3 RNA的提取 | 第52页 |
| 1.4 cDNA的获得 | 第52-53页 |
| 1.5 Real-Time PCR | 第53页 |
| 1.6 Real-Time PCR数据分析 | 第53页 |
| 1.7 酵母细胞蛋白的提取 | 第53页 |
| 1.8 蛋白浓度测定(BCA法) | 第53-54页 |
| 1.9 Wlestern Blot | 第54-55页 |
| 2 结果 | 第55-58页 |
| 2.1 △ glo1突变株中SpDJ-1以及Hsp3101-Hsp3105各生长时期转录水平 | 第55-56页 |
| 2.2 MG对SpDJ-1、Hsp3101和Hsp3102转录水平的影响 | 第56-57页 |
| 2.3 MG对SpDJ-1和Hsp3101蛋白水平的影响 | 第57-58页 |
| 3 讨论 | 第58-60页 |
| 第六章 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
