| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略词表 | 第12-13页 |
| 第1章 绪论 | 第13-27页 |
| 1.1 结肠癌 | 第13-14页 |
| 1.1.1 结肠癌概述 | 第13页 |
| 1.1.2 结肠癌临床治疗概述 | 第13-14页 |
| 1.2 肿瘤干细胞 | 第14-18页 |
| 1.2.1 肿瘤干细胞理论 | 第14-15页 |
| 1.2.2 肿瘤干细胞表面标志物 | 第15-16页 |
| 1.2.3 肿瘤干细胞的治疗抗性机制 | 第16-17页 |
| 1.2.4 肿瘤干细胞与肿瘤免疫 | 第17-18页 |
| 1.3 树突状细胞 | 第18-22页 |
| 1.3.1 树突状细胞体内来源、种类及分布 | 第18-19页 |
| 1.3.2 树突状细胞的免疫学功能 | 第19-20页 |
| 1.3.3 树突状细胞与肿瘤微环境 | 第20-21页 |
| 1.3.4 DC疫苗与肿瘤免疫 | 第21-22页 |
| 1.4 程序性死亡受体1及其配体 | 第22-26页 |
| 1.4.1 PD-1/PD-L1概述 | 第22-23页 |
| 1.4.2 PD-1/PD-L1与肿瘤免疫逃逸 | 第23-24页 |
| 1.4.2.1 PD-1/PD-L1抑制CD8+ CTL细胞功能 | 第23-24页 |
| 1.4.2.2 PD-L1促进上皮间充质转化来促进肿瘤的发展 | 第24页 |
| 1.4.3 靶向PD-L1的有关治疗 | 第24-26页 |
| 1.5 立题依据 | 第26-27页 |
| 第2章 材料与试剂 | 第27-32页 |
| 2.1 研究对象 | 第27页 |
| 2.1.1 细胞系 | 第27页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第27页 |
| 2.2 实验仪器 | 第27-28页 |
| 2.3 实验试剂 | 第28-29页 |
| 2.4 主要试剂的配制 | 第29-32页 |
| 2.4.1 磷酸盐缓冲溶液（PBS）的配制 | 第29页 |
| 2.4.2 0.25%胰酶-EDTA混合液的配制 | 第29页 |
| 2.4.3 RPMI 1640 培养基的配制 | 第29-30页 |
| 2.4.4 肿瘤干细胞DMEN/F12培养基的配制 | 第30页 |
| 2.4.5 磁珠分选所用Buffer的配制 | 第30-31页 |
| 2.4.5.1 Buffer 1 的配制 | 第30页 |
| 2.4.5.2 Buffer 2 的配制 | 第30-31页 |
| 2.4.5.3 Buffer 3 的配制 | 第31页 |
| 2.4.6 磁珠分选所用DNase I的配制 | 第31-32页 |
| 第3章 实验方法 | 第32-40页 |
| 3.1 小鼠结肠癌干细胞的分离培养 | 第32-34页 |
| 3.1.1 免疫磁珠法筛选CD44~+ CT-26 小鼠结肠癌干细胞 | 第32-33页 |
| 3.1.2 小鼠结肠癌干细胞的培养 | 第33-34页 |
| 3.2 小鼠结肠癌干细胞的鉴定 | 第34页 |
| 3.2.1 诱导分化实验 | 第34页 |
| 3.2.2 干细胞表面标记物的检测 | 第34页 |
| 3.3 树突状细胞的分离培养 | 第34-35页 |
| 3.4 树突状细胞的检测 | 第35-36页 |
| 3.4.1 树突状细胞表面标志物的检测 | 第35页 |
| 3.4.2 树突状细胞抗原提呈能力的检测 | 第35-36页 |
| 3.5 PD-L1在结肠癌细胞和结肠癌干细胞上的表达 | 第36页 |
| 3.6 DC疫苗的制备 | 第36-37页 |
| 3.6.1 肿瘤细胞和肿瘤干细胞完全抗原的制备 | 第36页 |
| 3.6.2 肿瘤细胞和肿瘤干细胞完全抗原与DC细胞共孵育 | 第36-37页 |
| 3.7 小鼠结肠癌模型的建立和免疫治疗实验 | 第37页 |
| 3.8 细胞毒性T淋巴细胞对小鼠结肠癌细胞的杀伤作用 | 第37-39页 |
| 3.8.1 T淋巴细胞的分离培养 | 第37-38页 |
| 3.8.2 CTL对小鼠结肠癌细胞的杀伤作用 | 第38-39页 |
| 3.9 统计学分析 | 第39-40页 |
| 第4章 实验结果 | 第40-50页 |
| 4.1 CD44~+ CT-26 小鼠结肠癌干细胞的分离和培养 | 第40-41页 |
| 4.1.1 CD44~+ CT-26 小鼠结肠癌干细胞的分离 | 第40页 |
| 4.1.2 CD44~+ CT-26 小鼠结肠癌干细胞的培养 | 第40-41页 |
| 4.2 CD4~4+ CT-26 小鼠结肠癌干细胞的鉴定 | 第41-42页 |
| 4.2.1 诱导分化实验 | 第41页 |
| 4.2.2 肿瘤干细胞特异性表面标志物检测 | 第41-42页 |
| 4.3 树突状细胞的培养 | 第42页 |
| 4.4 树突状细胞的鉴定 | 第42-44页 |
| 4.4.1 树突状细胞表面标志物的检测 | 第42-43页 |
| 4.4.2 树突状细胞抗原提呈能力的检测 | 第43-44页 |
| 4.5 PD-L1在结肠癌细胞和结肠癌干细胞上的表达 | 第44-45页 |
| 4.6 PD-L1单抗联合不同DC疫苗所产生的免疫治疗效果 | 第45-50页 |
| 4.6.1 小鼠肿瘤体积 | 第45-46页 |
| 4.6.2 小鼠肿瘤重量 | 第46-48页 |
| 4.6.3 LDH法检测CTL对结肠癌细胞的杀伤作用 | 第48-50页 |
| 第5章 讨论 | 第50-53页 |
| 第6章 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-63页 |
| 作者简介及攻读学位期间发表研究成果 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
