| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3页 |
| 引言 | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第7-17页 |
| 1.1 喹诺酮类药物及其发展简介 | 第7-8页 |
| 1.2 喹诺酮类药物的作用机制 | 第8-9页 |
| 1.3 大肠杆菌耐喹诺酮类药物机制的研究进展 | 第9页 |
| 1.4 基因编辑技术研究进展 | 第9-11页 |
| 1.5 新兴基因编辑技术CRISPR/Cas9简述 | 第11-15页 |
| 1.5.1 CRISPR/Cas的发现 | 第11页 |
| 1.5.2 CRISPR/Cas的基因座结构 | 第11-12页 |
| 1.5.3 CRISPR/Cas系统的作用机制及分类 | 第12-14页 |
| 1.5.4 CRISPR/Cas系统的应用 | 第14-15页 |
| 1.6 研究目的和内容 | 第15页 |
| 1.7 研究意义 | 第15-17页 |
| 第2章 基于CRISPR/Cas9技术的大肠杆菌gyrB466C突变体的构建 | 第17-34页 |
| 2.1 材料与方法 | 第17-20页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第17-18页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.3 实验设备 | 第19页 |
| 2.1.4 培养基和常用溶液的配制 | 第19-20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-29页 |
| 2.2.1 重组质粒的构建 | 第21-24页 |
| 2.2.2 靶向区域上下游同源片段的扩增和相连 | 第24-26页 |
| 2.2.3 电转化及gyrB466C突变体的鉴定 | 第26-29页 |
| 2.3 结果 | 第29-33页 |
| 2.3.1 重组质粒的构建及gyrB466突变位点上下游片段的扩增 | 第29-30页 |
| 2.3.2 线性pTargetF-spacer缺口的修复 | 第30-31页 |
| 2.3.3 gyrB466突变位点上下游片段的相连 | 第31-32页 |
| 2.3.4 gyrB466C突变的检测 | 第32页 |
| 2.3.5 消除质粒后gyrB466C位点突变的检测 | 第32-33页 |
| 2.4 讨论 | 第33页 |
| 2.5 小结 | 第33-34页 |
| 第3章 野生型MG1655 gyrB466E及突变型gyrB466C对环丙沙星的药物敏感性实验 | 第34-42页 |
| 3.1 材料与方法 | 第34-36页 |
| 3.1.1 菌株及质粒 | 第34页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第34-35页 |
| 3.1.3 实验设备 | 第35页 |
| 3.1.4 培养基和常用溶液的配制 | 第35-36页 |
| 3.2 实验方法 | 第36-38页 |
| 3.2.1 MIC值的测定 | 第36-37页 |
| 3.2.2 药物动力学实验 | 第37-38页 |
| 3.3 结果 | 第38-40页 |
| 3.3.1 MIC值的测定 | 第38-39页 |
| 3.3.2 药物动力学实验 | 第39-40页 |
| 3.4 讨论 | 第40-41页 |
| 3.5 小结 | 第41-42页 |
| 结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-47页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
