| 摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第12-22页 |
| 1.1 犊牛腹泻的概述 | 第12-14页 |
| 1.1.1 细菌性腹泻 | 第12-13页 |
| 1.1.2 病毒性腹泻 | 第13-14页 |
| 1.1.3 寄生虫性腹泻 | 第14页 |
| 1.2 犊牛大肠杆菌性腹泻 | 第14-16页 |
| 1.2.1 病原学研究 | 第14-15页 |
| 1.2.2 流行特点 | 第15页 |
| 1.2.3 临床症状和病理变化 | 第15-16页 |
| 1.2.4 防治 | 第16页 |
| 1.3 大肠杆菌毒力因子 | 第16-19页 |
| 1.3.1 黏附素 | 第16-17页 |
| 1.3.2 肠毒素 | 第17-19页 |
| 1.3.3 志贺毒素 | 第19页 |
| 1.4 大肠杆菌疫苗研究进展 | 第19-20页 |
| 1.4.1 灭活疫苗 | 第19-20页 |
| 1.4.2 亚单位疫苗 | 第20页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第20-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 菌株、质粒、实验动物及细胞系 | 第22页 |
| 2.1.2 主要试剂和耗材 | 第22页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-32页 |
| 2.2.1 LT-IIc1B-Stx2B-STa13融合基因的构建 | 第23-25页 |
| 2.2.2 重组蛋白LT-IIc1B-Stx2B-STa13的表达与鉴定 | 第25-27页 |
| 2.2.3 实验动物分组及免疫 | 第27-28页 |
| 2.2.4 免疫抗体检测 | 第28页 |
| 2.2.5 体内中和实验 | 第28-30页 |
| 2.2.6 体外中和实验 | 第30-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-44页 |
| 3.1 LT-IIc1B-Stx2B-STa13融合基因的构建 | 第32-33页 |
| 3.1.1 LT-IIc1B基因的扩增 | 第32页 |
| 3.1.2 Stx2B基因的扩增 | 第32-33页 |
| 3.1.3 LT-IIc1B-Stx2B-STa13融合基因的扩增 | 第33页 |
| 3.2 重组蛋白LT-IIc1B-Stx2B-STa13的表达 | 第33-35页 |
| 3.2.1 重组E.coli Rossetta/p HUE- LT-IIc1B-Stx2B-STa13的表达 | 第33-34页 |
| 3.2.2 重组蛋白rLT-IIc1B-Stx2B-STa13的表达和鉴定 | 第34-35页 |
| 3.3 免疫原的制备 | 第35页 |
| 3.4 免疫抗体的检测 | 第35-39页 |
| 3.5 体内中和实验 | 第39-40页 |
| 3.5.1 Stx2对小鼠的LD_(50)的测定 | 第39页 |
| 3.5.2 Stx2对小鼠的体内中和试验 | 第39页 |
| 3.5.3 乳鼠灌胃实验 | 第39-40页 |
| 3.6 体外中和试验 | 第40-44页 |
| 3.6.1 LT-IIc1对Y-1 细胞的毒性作用 | 第40页 |
| 3.6.2 Stx2对Vero细胞的毒性作用 | 第40-41页 |
| 3.6.3 LT-IIc1对Y-1 细胞半数致死量（CD50）的测定 | 第41页 |
| 3.6.4 LT-IIc1的中和效价 | 第41-42页 |
| 3.6.5 Stx2对Vero细胞CD50测定 | 第42-43页 |
| 3.6.6 Stx2的中和效价 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-47页 |
| 4.1 免疫抗原的选择 | 第44页 |
| 4.2 融合PCR技术的应用 | 第44-45页 |
| 4.3 免疫抗原包涵体和纯化蛋白的比较 | 第45页 |
| 4.4 亚单位疫苗的应用前景 | 第45-47页 |
| 5 结论 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第54页 |
