| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6页 |
| 英文缩略表 | 第10-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-19页 |
| 1.1 弓形虫及其弓形虫病概述 | 第11页 |
| 1.2 硫氧还蛋白及其在寄生虫的研究进展 | 第11-15页 |
| 1.2.1 TRX结构 | 第11-12页 |
| 1.2.2 TRX的主要生物学功能 | 第12-14页 |
| 1.2.3 寄生虫TRX研究进展 | 第14-15页 |
| 1.3 弓形虫硫氧还蛋白样蛋白 | 第15页 |
| 1.4 烯醇酶及其在寄生虫的研究进展 | 第15-18页 |
| 1.4.1 烯醇酶的结构特征 | 第16页 |
| 1.4.2 ENO的主要生物学功能 | 第16页 |
| 1.4.3 ENO在病原生物侵染宿主中的作用 | 第16-17页 |
| 1.4.4 寄生虫ENO研究进展 | 第17-18页 |
| 1.5 弓形虫烯醇酶2 | 第18-19页 |
| 第二章 弓形虫GJS株硫氧还蛋白样蛋白基因的克隆与原核表达 | 第19-26页 |
| 2.1 材料 | 第19页 |
| 2.1.1 虫株、菌株、质粒及阳性血清 | 第19页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第19页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第19页 |
| 2.2 方法 | 第19-20页 |
| 2.2.1 引物的设计与合成 | 第19页 |
| 2.2.2 弓形虫速殖子的收集及RNA的提取 | 第19-20页 |
| 2.2.3 RT-PCR扩增TRXL基因 | 第20页 |
| 2.2.4 重组表达质粒pET-30a(+)-TRXL的构建和鉴定 | 第20页 |
| 2.2.5 重组蛋白rTRXL的表达和定性分析 | 第20页 |
| 2.2.6 重组蛋白rTRXL的纯化 | 第20页 |
| 2.2.7 重组蛋白rTRXL的Western Blotting分析 | 第20页 |
| 2.3 结果 | 第20-24页 |
| 2.3.1 TRXL基因的扩增 | 第20-21页 |
| 2.3.2 pMD-18T-TRXL重组质粒的鉴定 | 第21-22页 |
| 2.3.3 TRXL基因序列分析 | 第22页 |
| 2.3.4 重组表达质粒pET-30a(+)-TRXL的双酶切鉴定 | 第22页 |
| 2.3.5 rTRXL蛋白SDS-PAGE及可溶性分析 | 第22-23页 |
| 2.3.6 rTRXL的纯化 | 第23-24页 |
| 2.3.7 rTRXL的Western Blotting分析 | 第24页 |
| 2.4 讨论 | 第24-26页 |
| 第三章 弓形虫GJS株烯醇酶 2（ENO2）基因的克隆与原核表达 | 第26-33页 |
| 3.1 材料 | 第26页 |
| 3.1.1 弓形虫GJS株速殖子及阳性血清 | 第26页 |
| 3.1.2 实验动物 | 第26页 |
| 3.1.3 质粒和菌株 | 第26页 |
| 3.1.4 主要试剂 | 第26页 |
| 3.2 方法 | 第26-27页 |
| 3.2.1 引物的设计与合成 | 第26页 |
| 3.2.2 弓形虫速殖子的收集及RNA的提取 | 第26-27页 |
| 3.2.3 RT-PCR扩增ENO2基因 | 第27页 |
| 3.2.4 重组表达质粒pET-30a(+)-ENO2的构建和鉴定 | 第27页 |
| 3.2.5 重组蛋白rENO2的表达及定性分析 | 第27页 |
| 3.2.6 重组蛋白rENO2的纯化 | 第27页 |
| 3.2.7 重组蛋白rENO2的Western Blotting分析 | 第27页 |
| 3.3 结果 | 第27-32页 |
| 3.3.1 ENO2基因的扩增 | 第27-28页 |
| 3.3.2 pMD-18T-ENO2重组质粒的鉴定 | 第28-29页 |
| 3.3.3 ENO2基因序列分析 | 第29页 |
| 3.3.4 重组表达质粒pET-30a(+)-ENO2的双酶切鉴定 | 第29页 |
| 3.3.5 rENO2蛋白SDS-PAGE鉴定 | 第29-30页 |
| 3.3.6 rENO2的可溶性分析 | 第30-31页 |
| 3.3.7 rENO2的纯化 | 第31页 |
| 3.3.8 rENO2的Western Blotting分析 | 第31-32页 |
| 3.4 讨论 | 第32-33页 |
| 第四章 弓形虫硫氧还蛋白样蛋白与烯醇酶2蛋白免疫保护力评价 | 第33-40页 |
| 4.1 材料 | 第33页 |
| 4.1.1 虫株与实验动物 | 第33页 |
| 4.1.2 主要实验试剂 | 第33页 |
| 4.2 方法 | 第33-35页 |
| 4.2.1 重组蛋白rENO2、rTRXL的大量表达纯化 | 第33-34页 |
| 4.2.2 rENO2+TRXL混合蛋白的制备 | 第34页 |
| 4.2.3 弓形虫ENO2、TRXL蛋白及ENO2+TRXL混合蛋白疫苗的制备 | 第34页 |
| 4.2.4 小鼠免疫实验 | 第34页 |
| 4.2.5 小鼠血清的制备 | 第34页 |
| 4.2.6 ELISA方法检测小鼠血清特异性抗体IgG | 第34页 |
| 4.2.7 免疫小鼠脾细胞悬液的制备 | 第34-35页 |
| 4.2.8 免疫效果的评价 | 第35页 |
| 4.2.9 弓形虫GJS株感染试验 | 第35页 |
| 4.3 结果 | 第35-38页 |
| 4.3.1 ELISA抗体检测 | 第35-36页 |
| 4.3.2 免疫小鼠脾脏淋巴细胞的增殖 | 第36-37页 |
| 4.3.3 免疫小鼠CD4+和CD8+细胞的检测 | 第37页 |
| 4.3.4 弓形虫GJS株急性感染试验 | 第37-38页 |
| 4.4 讨论 | 第38-40页 |
| 第五章 全文结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 简历 | 第46页 |
