| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-21页 |
| 1.1 表观遗传学 | 第15-17页 |
| 1.1.1 表观遗传学概述 | 第15页 |
| 1.1.2 DNA甲基化 | 第15-16页 |
| 1.1.3 组蛋白修饰 | 第16页 |
| 1.1.4 染色质重塑 | 第16-17页 |
| 1.1.5 小的非编码RNA | 第17页 |
| 1.2 组蛋白甲基化转移酶SMYD3 | 第17-21页 |
| 1.2.1 SMYD3概述 | 第17-18页 |
| 1.2.2 SMYD3的结构与功能 | 第18页 |
| 1.2.3 SMYD3与癌症的关系 | 第18-19页 |
| 1.2.4 SMYD3的下游靶基因研究 | 第19-21页 |
| 第二章 引言 | 第21-23页 |
| 2.1 研究背景、目的及意义 | 第21页 |
| 2.2 研究内容及技术路线 | 第21-23页 |
| 2.2.1 研究内容 | 第21-22页 |
| 2.2.2 技术路线 | 第22-23页 |
| 第三章 SMYD3对神经母细胞瘤的临床意义及其表达分析 | 第23-35页 |
| 3.1 材料和试剂仪器 | 第23-26页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第23页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第23-24页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第24页 |
| 3.1.4 溶液配制 | 第24-26页 |
| 3.2 实验方法 | 第26-31页 |
| 3.2.1 临床数据分析 | 第26页 |
| 3.2.2 细胞培养 | 第26-27页 |
| 3.2.3 cDNA模板的准备 | 第27-28页 |
| 3.2.4 荧光定量PCR | 第28-29页 |
| 3.2.5 总蛋白的提取 | 第29-30页 |
| 3.2.6 Western Blot检测目的蛋白 | 第30-31页 |
| 3.2.7 免疫荧光染色 | 第31页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第31-33页 |
| 3.3.1 数据库分析结果 | 第31-33页 |
| 3.3.2 SMYD3在神经母细胞瘤细胞系中的表达 | 第33页 |
| 3.4 讨论与小结 | 第33-35页 |
| 3.4.1 讨论 | 第33-34页 |
| 3.4.2 小结 | 第34-35页 |
| 第四章 SMYD3对神经母细胞瘤细胞增殖的影响 | 第35-45页 |
| 4.1 材料和试剂仪器 | 第35-36页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第35页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第35页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第35-36页 |
| 4.2 实验方法 | 第36-38页 |
| 4.2.1 慢病毒感染细胞 | 第36页 |
| 4.2.2 BrdU染色 | 第36页 |
| 4.2.3 免疫荧光染色 | 第36-37页 |
| 4.2.4 Soft Agar实验 | 第37页 |
| 4.2.5 MTT实验 | 第37-38页 |
| 4.3 结果和讨论 | 第38-43页 |
| 4.3.1 干涉SMYD3对细胞增殖的影响 | 第38-41页 |
| 4.3.2 SMYD3恢复实验 | 第41-43页 |
| 4.4 讨论与小结 | 第43-45页 |
| 第五章 SMYD3对细胞周期和凋亡的影响 | 第45-53页 |
| 5.1 材料和试剂仪器 | 第45-46页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第45页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第45页 |
| 5.1.3 实验仪器 | 第45页 |
| 5.1.4 主要的抗体 | 第45-46页 |
| 5.2 实验方法 | 第46页 |
| 5.2.1 细胞周期分析 | 第46页 |
| 5.2.2 周期相关蛋白水平的检测 | 第46页 |
| 5.3 结果与分析 | 第46-51页 |
| 5.3.1 细胞周期变化 | 第46-48页 |
| 5.3.2 细胞周期蛋白表达的变化 | 第48-50页 |
| 5.3.3 细胞凋亡检测 | 第50-51页 |
| 5.4 讨论与小结 | 第51-53页 |
| 5.4.1 讨论 | 第51-52页 |
| 5.4.2 小结 | 第52-53页 |
| 第六章 SMYD3对神经母细胞瘤增殖相关信号通路的影响 | 第53-59页 |
| 6.1 材料和试剂仪器 | 第53-54页 |
| 6.1.1 实验材料 | 第53页 |
| 6.1.2 实验试剂 | 第53页 |
| 6.1.3 实验仪器 | 第53页 |
| 6.1.4 主要的抗体 | 第53-54页 |
| 6.2 实验方法 | 第54页 |
| 6.2.1 慢病毒感染细胞 | 第54页 |
| 6.2.2 细胞增殖相关蛋白的检测 | 第54页 |
| 6.3 结果与分析 | 第54-56页 |
| 6.3.1 SMYD3对神经母细胞瘤增殖相关信号通路的影响 | 第54-55页 |
| 6.3.2 SMYD3影响P53泛素化蛋白TRIM24的表达 | 第55-56页 |
| 6.4 讨论与小结 | 第56-59页 |
| 6.4.1 泛素化修饰系统与TRIM24 | 第56-57页 |
| 6.4.2 小结 | 第57-59页 |
| 第七章 TRIM24干涉和过表达载体的构建 | 第59-69页 |
| 7.1 材料和仪器 | 第59-60页 |
| 7.1.1 实验材料 | 第59页 |
| 7.1.2 实验试剂 | 第59-60页 |
| 7.1.3 主要溶液配制 | 第60页 |
| 7.1.4 实验仪器 | 第60页 |
| 7.2 实验方法 | 第60-62页 |
| 7.2.1 TRIM24全长目的片段的扩增 | 第60页 |
| 7.2.2 目的片段的回收 | 第60-61页 |
| 7.2.3 目的片段与载体的连接 | 第61页 |
| 7.2.4 转化 | 第61页 |
| 7.2.5 筛选阳性克隆 | 第61页 |
| 7.2.6 测序及比对 | 第61页 |
| 7.2.7 目的基因和过表达载体的酶切 | 第61页 |
| 7.2.8 载体片段的回收及去磷酸化 | 第61-62页 |
| 7.2.9 载体与目的基因的连接 | 第62页 |
| 7.2.10 重复步骤 6.3.6.4 和 6.3.6.5 | 第62页 |
| 7.2.11 酶切验证 | 第62页 |
| 7.3 结果与分析 | 第62-66页 |
| 7.3.1 TRIM24过表达载体的构建 | 第62-64页 |
| 7.3.2 TRIM24干涉载体的构建 | 第64-66页 |
| 7.4 讨论与小结 | 第66-69页 |
| 7.4.1 讨论 | 第66-67页 |
| 7.4.2 小结 | 第67-69页 |
| 第八章 SMYD3对基因TRIM24的调控研究 | 第69-79页 |
| 8.1 材料和试剂仪器 | 第69-70页 |
| 8.1.1 实验材料 | 第69页 |
| 8.1.2 实验试剂 | 第69页 |
| 8.1.3 实验仪器 | 第69-70页 |
| 8.2 实验方法 | 第70-72页 |
| 8.2.1 TRIM24的数据库分析 | 第70页 |
| 8.2.2 TRIM24在神经母细胞瘤和胶质瘤中的表达谱分析 | 第70页 |
| 8.2.3 慢病毒包装、感染及鉴定 | 第70-71页 |
| 8.2.4 慢病毒感染细胞(见 4.2.3) | 第71页 |
| 8.2.5 MTT实验 | 第71页 |
| 8.2.6 免疫荧光染色 | 第71-72页 |
| 8.2.7 细胞周期分析 | 第72页 |
| 8.3 实验结果与分析 | 第72-77页 |
| 8.3.1 R2数据平台Versteeg数据库的分析结果 | 第72-74页 |
| 8.3.2 TRIM24基因在神经母细胞瘤和胶质瘤中普遍表达 | 第74页 |
| 8.3.3 TRIM24促进神经母细胞瘤增殖 | 第74-75页 |
| 8.3.4 TRIM24的下游信号通路检测 | 第75-76页 |
| 8.3.5 TRIM24能够部分挽救shSMYD3细胞系的增殖 | 第76-77页 |
| 8.4 讨论与小结 | 第77-79页 |
| 8.4.1 讨论 | 第77-78页 |
| 8.4.2 小结 | 第78-79页 |
| 第九章 全文总结 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-85页 |
| 缩略词表 | 第85-87页 |
| 致谢 | 第87-89页 |
| 硕士在读期间发表的文章及参研课题情况 | 第89页 |
