| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-30页 |
| 1.1 植物抗病机制 | 第13-21页 |
| 1.1.1 植物先天免疫系统 | 第13-15页 |
| 1.1.2 植物超敏反应 | 第15-17页 |
| 1.1.3 植物系统获得性抗性 | 第17-21页 |
| 1.2 P450基因与植物抗病 | 第21-25页 |
| 1.2.1 P450的结构和分类 | 第21-22页 |
| 1.2.2 P450广泛参与植物抗病响应 | 第22-23页 |
| 1.2.3 P450与抗病相关的次生代谢 | 第23-25页 |
| 1.2.4 P450与抗病信号分子茉莉酸 | 第25页 |
| 1.3 棉花黄萎病及抗病机制 | 第25-29页 |
| 1.3.1 棉花黄萎病菌的分子与遗传研究 | 第25-26页 |
| 1.3.2 棉花抗黄萎病常规育种研究 | 第26-27页 |
| 1.3.3 抗黄萎病相关QTLs的挖掘 | 第27-28页 |
| 1.3.4 棉花抗黄萎病转基因育种 | 第28页 |
| 1.3.5 植物抗黄萎病信号及代谢路径的分析 | 第28-29页 |
| 1.4 本课题的研究目的及意义 | 第29-30页 |
| 2 材料方法 | 第30-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第30-31页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第30-31页 |
| 2.1.2 主要菌株和载体 | 第31页 |
| 2.1.3 主要酶类和试剂 | 第31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-43页 |
| 2.2.1 棉花幼苗的激素和脂肪酸类物质的外源处理 | 第31-32页 |
| 2.2.2 创伤处理 | 第32页 |
| 2.2.3 黄萎病菌接种处理 | 第32-34页 |
| 2.2.4 SSN基因家族成员的克隆与序列分析 | 第34-35页 |
| 2.2.5 载体构建及遗传转化 | 第35页 |
| 2.2.6 VIGS介导的基因沉默 | 第35-36页 |
| 2.2.7 Illumina测序分析 | 第36-37页 |
| 2.2.8 组织化学染色分析 | 第37-38页 |
| 2.2.9 H_2O_2含量的测定 | 第38-39页 |
| 2.2.10 透射电镜扫描 | 第39页 |
| 2.2.11 RT-PCR和荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)分析 | 第39-40页 |
| 2.2.12 转基因分子鉴定(Southern,Northern and Western blotting) | 第40-41页 |
| 2.2.13 SSN基因的酵母异源表达体系 | 第41页 |
| 2.2.14 亚细胞定位分析 | 第41-42页 |
| 2.2.15 脂肪酸含量测定 | 第42-43页 |
| 2.2.16 植物激素及氧化脂类含量测定 | 第43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-93页 |
| 3.1 P450亚家族成员CYP82D在棉花中的克隆、结构及表达分析 | 第43-53页 |
| 3.1.1 棉花中CYP82D基因的分离与的序列分析 | 第43-45页 |
| 3.1.2 不同物种间CYP82家族成员的亲缘关系分析 | 第45-46页 |
| 3.1.3 GhCYP82D基因的启动子的克隆 | 第46-48页 |
| 3.1.4 启动子表达转基因植株的鉴定 | 第48页 |
| 3.1.5 GhCYP82D启动子的表达特性检测 | 第48-50页 |
| 3.1.6 SSN基因在不同抗感棉花材料接种黄萎病菌后中的表达差异 | 第50-51页 |
| 3.1.7 SSN对主要抗病相关激素的响应 | 第51-53页 |
| 3.2 转基因植株的表型鉴定 | 第53-63页 |
| 3.2.1 SSN保守区段RNAi表型鉴定 | 第53-58页 |
| 3.2.2 SSN1、SSN2、SSN3特异区段RNAi表型鉴定 | 第58-60页 |
| 3.2.3 特异抑制表达植株的杂交实验 | 第60-62页 |
| 3.2.4 SSN超量表达植株的鉴定 | 第62-63页 |
| 3.3 SSN基因参与调控茉莉酸合成与信号转导 | 第63-73页 |
| 3.3.1 SSN-RNAi植株的类病斑发生机制的初步鉴定 | 第63-66页 |
| 3.3.2 SSN-RNAi植株的RNA-Seq测序数据分析及验证 | 第66-67页 |
| 3.3.3 SSN的表达差异影响转基因植株中茉莉酸的合成 | 第67-70页 |
| 3.3.4 在伤害诱导条件下转基因植株中茉莉酸代谢的变化 | 第70-72页 |
| 3.3.5 转基因材料对茉莉酸的敏感性测定 | 第72-73页 |
| 3.4 SSN基因通过调控octadecanoid路径影响茉莉酸代谢 | 第73-81页 |
| 3.4.1 octadecanoid代谢通路相关基因的表达鉴定 | 第73-74页 |
| 3.4.2 SSN基因在C18不饱和脂肪酸处理条件下的表达差异 | 第74-76页 |
| 3.4.3 SSN在VIGS介导的LOXs基因沉默转基因植株中的表达变化 | 第76-77页 |
| 3.4.4 转基因植株中游离脂肪酸的含量测定 | 第77-78页 |
| 3.4.5 转基因植株中的氧化脂类的含量差异 | 第78-79页 |
| 3.4.6 SSN基因在酿酒酵母中表达 | 第79页 |
| 3.4.7 SSN1蛋白的亚细胞定位分析 | 第79-80页 |
| 3.4.8 野生型与转基因植株子叶组织的超微结构比较分析 | 第80-81页 |
| 3.5 SSN-RNAi转基因植株中HR-like坏死表型的成因分析 | 第81-91页 |
| 3.5.1 子叶中LOX1代谢途径组成型激活导致细胞死亡 | 第81-83页 |
| 3.5.2 子叶中伴随着JA合成及信号途径的激活 | 第83-84页 |
| 3.5.3 SSN抑制表达后茎杆的坏死属于系统性细胞死亡 | 第84-86页 |
| 3.5.4 SSN-RNAi转基因植物中存在可传递的系统坏死抗性信号 | 第86-88页 |
| 3.5.5 SSN所介导的系统性死亡信号与SAR信号分子之间的关系 | 第88-91页 |
| 3.6 转基因植株接种黄萎病的抗病性鉴定及分析 | 第91-93页 |
| 3.6.1 SSN基因负调控棉花对黄萎病菌的抗性 | 第91-92页 |
| 3.6.2 RNAi株系中茉莉酸路径的组成型激活影响对黄萎病菌的抗性 | 第92-93页 |
| 4 讨论 | 第93-100页 |
| 4.1 CYP82家族成员广泛参与植物的生物胁迫反应 | 第93-94页 |
| 4.2 HR反应在棉花中的独特性 | 第94-95页 |
| 4.3 SSN通过氧化脂类代谢调节SSN-RNAi株系中的HR-like反应 | 第95-96页 |
| 4.4 脂类物质中存在SAR信号分子 | 第96-98页 |
| 4.5 SSN调控的系统性细胞死亡信号是植物SAR的重要组分 | 第98页 |
| 4.6 SSN作为一个新的脂代谢因子调节SAR信号的产生 | 第98-99页 |
| 4.7 SSN在棉花抗黄萎病中的作用 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-117页 |
| 附录 | 第117-142页 |
| 攻读学位期间已发表和待发表论文 | 第142-143页 |
| 申请专利 | 第143-144页 |
| 致谢 | 第144-146页 |
