| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 第1章 引言 | 第13-25页 |
| 1.1 研究目的及意义 | 第13页 |
| 1.2 烟草黄酮类化合物的代谢及其调控机制 | 第13-24页 |
| 1.2.1 植物黄酮类化合物的分类、结构及功能 | 第13-14页 |
| 1.2.2 植物黄酮类化合物的代谢途径 | 第14-18页 |
| 1.2.2.1 黄烷酮的合成 | 第15页 |
| 1.2.2.2 黄酮和异黄酮的合成 | 第15页 |
| 1.2.2.3 二氢黄酮醇和黄酮醇的合成 | 第15-16页 |
| 1.2.2.4 花色素和原花色素的合成 | 第16-18页 |
| 1.2.2.5 芦丁等黄酮苷的合成 | 第18页 |
| 1.2.3 烟草黄酮类化合物的代谢及其与烟叶品质的关系 | 第18-19页 |
| 1.2.4 植物黄酮类化合物代谢途径的调控 | 第19-22页 |
| 1.2.4.1 外界因素的调控 | 第19-20页 |
| 1.2.4.2 转录因子的调控 | 第20-22页 |
| 1.2.5 研究展望 | 第22-24页 |
| 1.3 技术路线 | 第24-25页 |
| 第2章 不同生长温度对烟草叶片黄酮类化合物及其代谢途径的调控 | 第25-48页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 材料与方法 | 第25-35页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第25-26页 |
| 2.2.2 材料培养与处理 | 第26-27页 |
| 2.2.2.1 育苗 | 第26页 |
| 2.2.2.2 温度处理 | 第26-27页 |
| 2.2.2.3 样品采集 | 第27页 |
| 2.2.3 黄酮类化合物含量的测定 | 第27-28页 |
| 2.2.3.1 样品提取 | 第27-28页 |
| 2.2.3.2 色谱条件 | 第28页 |
| 2.2.3.3 质谱条件 | 第28页 |
| 2.2.4 类黄酮代谢关键酶活性的测定 | 第28-30页 |
| 2.2.4.1 可溶性蛋白含量的测定 | 第28-29页 |
| 2.2.4.2 苯丙氨解氨酶(PAL)活性测定 | 第29页 |
| 2.2.4.3 肉桂酸4羟化酶(C4H)活性测定 | 第29页 |
| 2.2.4.4 4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL)活性的测定 | 第29-30页 |
| 2.2.4.5 查尔酮异构酶(CHI)活性测定 | 第30页 |
| 2.2.5 烟草(Nicotiana tabacum L. var. Yun87)全转录组的测序及解析 | 第30-31页 |
| 2.2.5.1 Denovo全转录组测序文库的构建及测序 | 第30-31页 |
| 2.2.5.2 测序reads去噪及序列从头拼接(denovo) | 第31页 |
| 2.2.5.3 Unigene数据的功能注释、分类及代谢途径分析 | 第31页 |
| 2.2.5.4 类黄酮代谢关键基因的鉴定 | 第31页 |
| 2.2.6 类黄酮代谢相关基因的实时荧光定量PCR分析 | 第31-35页 |
| 2.2.6.1 RNA的提取 | 第32页 |
| 2.2.6.2 RNA质量检测 | 第32-33页 |
| 2.2.6.3 引物设计及cDNA合成 | 第33页 |
| 2.2.6.4 标准曲线的制作 | 第33页 |
| 2.2.6.5 基因表达量分析 | 第33-35页 |
| 2.2.7 数据处理 | 第35页 |
| 2.3 结果与分析 | 第35-46页 |
| 2.3.1 不同生长温度对烟叶类黄酮含量的影响 | 第35-36页 |
| 2.3.2 不同生长温度对烟叶可溶性蛋白含量的影响 | 第36-37页 |
| 2.3.3 不同生长温度对烟叶类黄酮代谢相关酶活性的影响 | 第37-39页 |
| 2.3.4 转录组解析结果 | 第39-41页 |
| 2.3.4.1 测序数据处理及统计 | 第39页 |
| 2.3.4.2 Unigene功能注释 | 第39页 |
| 2.3.4.3 Unigene的GO分类 | 第39-40页 |
| 2.3.4.4 转录组中类黄酮代谢相关Unigenes的鉴定 | 第40-41页 |
| 2.3.5 不同生长温度对烟叶类黄酮代谢相关基因表达的影响 | 第41-46页 |
| 2.3.5.1 RNA的质量检测 | 第41-42页 |
| 2.3.5.2 基因的标准曲线 | 第42页 |
| 2.3.5.3 基因表达量分析 | 第42-46页 |
| 2.4 讨论 | 第46-48页 |
| 第3章 不同施氮水平对烟草叶片黄酮类化合物及其代谢途径的调控 | 第48-64页 |
| 3.1 引言 | 第48页 |
| 3.2 材料与方法 | 第48-51页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第48-49页 |
| 3.2.2 材料培养与处理 | 第49页 |
| 3.2.2.1 育苗与施氮处理 | 第49页 |
| 3.2.2.2 样品采集 | 第49页 |
| 3.2.3 黄酮类化合物含量的测定 | 第49-50页 |
| 3.2.3.1 总黄酮含量的测定 | 第49页 |
| 3.2.3.2 芸香苷和山奈酚3O-芸香苷含量的测定 | 第49-50页 |
| 3.2.4 黄酮类化合物代谢关键酶PAL、CHI活性的测定 | 第50页 |
| 3.2.4.1 可溶性蛋白含量的测定 | 第50页 |
| 3.2.4.2 苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性测定 | 第50页 |
| 3.2.4.3 查尔酮异构酶(CHI)活性测定 | 第50页 |
| 3.2.5 类黄酮代谢相关基因的实时荧光定量PCR分析 | 第50-51页 |
| 3.2.5.1 RNA提取与质量检测 | 第50页 |
| 3.2.5.2 引物设计及cDNA合成 | 第50页 |
| 3.2.5.3 标准曲线的制作 | 第50页 |
| 3.2.5.4 基因表达量分析 | 第50-51页 |
| 3.2.6 数据处理 | 第51页 |
| 3.3 结果与分析 | 第51-62页 |
| 3.3.1 施氮水平对烟草叶片黄酮类化合物含量的影响 | 第51-54页 |
| 3.3.1.1 施氮水平对于总黄酮含量的影响 | 第52-53页 |
| 3.3.1.2 施氮水平对芸香苷和山奈酚3O-芸香苷含量的影响 | 第53-54页 |
| 3.3.2 不同施氮水平对烟叶可溶性蛋白含量的影响 | 第54页 |
| 3.3.3 施氮水平对烟叶黄酮类化合物代谢关键酶活性的影响 | 第54-56页 |
| 3.3.4 施氮水平对烟叶黄酮类化合物代谢关键酶基因表达的影响 | 第56-62页 |
| 3.3.4.1 RNA的质量检测 | 第56-57页 |
| 3.3.4.2 施氮水平对烟叶黄酮类化合物代谢关键酶基因表达的影响 | 第57-62页 |
| 3.4 讨论 | 第62-64页 |
| 第4章 总结与展望 | 第64-66页 |
| 4.1 总结 | 第64-65页 |
| 4.2 展望 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文和研究成果 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
