| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-20页 |
| 1.1 NADH氧化酶 | 第11-16页 |
| 1.1.1 NADH氧化酶的来源及分类 | 第11-12页 |
| 1.1.2 NADH氧化酶的催化机理 | 第12-14页 |
| 1.1.3 NADH氧化酶的结构特点 | 第14-16页 |
| 1.2 定点突变在蛋白质结构改造后的应用 | 第16-18页 |
| 1.2.1 定点突变的原理 | 第16-17页 |
| 1.2.2 定点突变与结构改造 | 第17-18页 |
| 1.3 本文选题的主要目的、意义以及主要研究内容 | 第18-20页 |
| 1.3.1 本文选题的目的、意义 | 第18页 |
| 1.3.2 本文主要研究内容 | 第18-20页 |
| 第二章 来源于鼠李糖乳杆菌的NADH氧化酶的性质研究 | 第20-48页 |
| 2.1 引言 | 第20页 |
| 2.2 实验试剂与仪器 | 第20-21页 |
| 2.2.1 实验试剂 | 第20-21页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第21页 |
| 2.3 实验方法 | 第21-31页 |
| 2.3.1 Nox基因的克隆表达 | 第21-26页 |
| 2.3.2 重组NADH氧化酶的纯化 | 第26-27页 |
| 2.3.3 NADH氧化酶活力测定 | 第27页 |
| 2.3.4 蛋白含量测定 | 第27-28页 |
| 2.3.5 Nox(447)酶学性质表征 | 第28-30页 |
| 2.3.6 同源建模与分子对接 | 第30-31页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第31-46页 |
| 2.4.1 NADH氧化酶序列分析 | 第31-32页 |
| 2.4.2 NADH氧化酶的表达以及表达条件优化 | 第32-35页 |
| 2.4.3 蛋白纯化 | 第35-36页 |
| 2.4.4 Nox(447)性质表征 | 第36-43页 |
| 2.4.5 同源建模与分子对接 | 第43-46页 |
| 2.5 本章小结 | 第46-48页 |
| 第三章 利用定点突变改造NADH氧化酶结构 | 第48-65页 |
| 3.1 引言 | 第48页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第48-49页 |
| 3.2.1 基因和载体 | 第48页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第48页 |
| 3.2.3 软件 | 第48-49页 |
| 3.3 实验方法 | 第49-52页 |
| 3.3.1 重组质粒pET28a-Nox(603)质粒提取 | 第49页 |
| 3.3.2 定点突变位点的选择 | 第49页 |
| 3.3.3 引物设计与合成 | 第49-50页 |
| 3.3.4 PCR介导的定点突变 | 第50-51页 |
| 3.3.5 PCR产物的转化 | 第51-52页 |
| 3.3.6 突变体蛋白的表达和纯化 | 第52页 |
| 3.3.7 圆二色谱分析 | 第52页 |
| 3.3.8 Nox(603)与突变体酶的动力学实验 | 第52页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第52-64页 |
| 3.4.1 突变位点的选择 | 第52-54页 |
| 3.4.2 合成突变体质粒 | 第54-56页 |
| 3.4.3 突变体酶的表达与纯化 | 第56-57页 |
| 3.4.4 圆二色谱分析 | 第57-58页 |
| 3.4.5 动力学分析 | 第58-59页 |
| 3.4.6 分子对接 | 第59-64页 |
| 3.5 本章小结 | 第64-65页 |
| 第四章 全文总结与展望 | 第65-69页 |
| 4.1 主要结论 | 第65-66页 |
| 4.2 本论文的创新点 | 第66-67页 |
| 4.3 展望 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 | 第77页 |
