| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 主要缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-18页 |
| 1.1 弓形虫入侵机制 | 第14页 |
| 1.2 弓形虫入侵相关蛋白 | 第14-15页 |
| 1.3 弓形虫感染与细胞凋亡 | 第15页 |
| 1.4 ROP16研究现状 | 第15-16页 |
| 1.5 本课题意义 | 第16-18页 |
| 第二章 弓形虫ROP16的原核表达 | 第18-42页 |
| 2.1 实验仪器和材料 | 第18-23页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第18页 |
| 2.1.2 实验耗材 | 第18页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.4 试剂配制 | 第19-23页 |
| 2.1.5 载体与菌株 | 第23页 |
| 2.1.6 细胞和虫体 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-34页 |
| 2.2.1 HFF细胞系的传代培养 | 第23页 |
| 2.2.2 弓形虫速殖子的培养 | 第23-24页 |
| 2.2.3 弓形虫速殖子DNA提取 | 第24页 |
| 2.2.4 弓形虫ROP16基因的扩增 | 第24-26页 |
| 2.2.5 弓形虫ROP16/pTG19-T载体的构建与鉴定 | 第26-28页 |
| 2.2.6 ROP16/pET32a原核表达载体的构建与鉴定 | 第28-30页 |
| 2.2.7 ROP16蛋白的表达与纯化 | 第30-34页 |
| 2.3 结果 | 第34-40页 |
| 2.3.1 弓形虫ROP16基因的扩增 | 第34页 |
| 2.3.2 ROP16/pTG19-T重组质粒鉴定 | 第34-36页 |
| 2.3.3 ROP16/pET32a重组质粒鉴定 | 第36-37页 |
| 2.3.4 ROP16重组蛋白诱导表达及可溶性分析 | 第37-39页 |
| 2.3.5 Ni-NTA亲和层析纯化法纯化目的蛋白 | 第39页 |
| 2.3.6 KCl染色切胶法纯化ROP16重组蛋白 | 第39-40页 |
| 2.4 讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 ROP16多抗的制备与鉴定 | 第42-52页 |
| 3.1 实验仪器和材料 | 第42-45页 |
| 3.1.1 实验仪器 | 第42页 |
| 3.1.2 实验动物 | 第42页 |
| 3.1.3 实验耗材 | 第42页 |
| 3.1.4 试剂及其配制 | 第42-45页 |
| 3.1.5 细胞和虫体 | 第45页 |
| 3.2 实验方法 | 第45-48页 |
| 3.2.1 ROP16多克隆抗体的制备 | 第45-47页 |
| 3.2.2 ROP16多克隆抗体的鉴定 | 第47-48页 |
| 3.3 结果 | 第48-50页 |
| 3.3.1 ELISA检测多克隆抗体效价 | 第48-49页 |
| 3.3.2 Western blotting检测多克隆抗体 | 第49页 |
| 3.3.3 IFA检测弓形虫ROP16的表达 | 第49-50页 |
| 3.4 讨论 | 第50-52页 |
| 第四章 弓形虫ROP16的真核表达 | 第52-64页 |
| 4.1 实验仪器和材料 | 第52-53页 |
| 4.1.1 实验仪器 | 第52页 |
| 4.1.2 实验耗材 | 第52页 |
| 4.1.3 实验试剂及其配制 | 第52页 |
| 4.1.4 载体与菌株 | 第52页 |
| 4.1.5 细胞和虫体 | 第52-53页 |
| 4.2 实验方法 | 第53-59页 |
| 4.2.1 ROP16真核表达载体的构建及鉴定 | 第53-55页 |
| 4.2.2 p3XFLAG-Myc-CMV?24ROP16质粒和空质粒的大量提取 | 第55页 |
| 4.2.3 293T细胞的复苏与培养 | 第55-56页 |
| 4.2.4 p3XFLAG-Myc-CMV?24ROP16转染 293T细胞 | 第56页 |
| 4.2.5 Western blotting法检测ROP16的表达 | 第56-57页 |
| 4.2.6 RT-PCR法检测ROP16在 293T细胞中的表达 | 第57-59页 |
| 4.3 结果 | 第59-61页 |
| 4.3.1 ROP16真核表达载体的PCR和双酶切鉴定 | 第59-60页 |
| 4.3.2 ROP16在 293T细胞内表达的检测 | 第60-61页 |
| 4.4 讨论 | 第61-64页 |
| 第五章 ROP16对 293T细胞凋亡的影响 | 第64-76页 |
| 5.1 实验仪器与材料 | 第64-65页 |
| 5.1.1 实验仪器 | 第64页 |
| 5.1.2 实验耗材 | 第64页 |
| 5.1.3 实验试剂及配制 | 第64-65页 |
| 5.1.4 细胞 | 第65页 |
| 5.2 实验方法 | 第65-70页 |
| 5.2.1 293T细胞的复苏与培养 | 第65页 |
| 5.2.2 293T细胞的转染与凋亡的诱导 | 第65页 |
| 5.2.3 Annexin V-FITC/PI法检测 293T细胞凋亡 | 第65-66页 |
| 5.2.4 TUNEL法检测 293T细胞凋亡 | 第66-67页 |
| 5.2.5 RT-PCR法检测凋亡相关基因 | 第67-70页 |
| 5.3 结果 | 第70-74页 |
| 5.3.1 AnnexinV-FITC/PI法检测细胞凋亡 | 第70-71页 |
| 5.3.2 TUNEL法检测细胞凋亡 | 第71-72页 |
| 5.3.3 凋亡相关因子Bcl-2、Bax的检测 | 第72-73页 |
| 5.3.4 凋亡相关因子Caspase3的检测 | 第73-74页 |
| 5.4 讨论 | 第74-76页 |
| 结论与展望 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-86页 |
| 致谢 | 第86-88页 |
| 读研期间发表论文、参加课题 | 第88-89页 |
