| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 miRNA对植物非生物胁迫的响应 | 第11-22页 |
| 1.1 miRNA的发现、生成和作用机制 | 第11-13页 |
| 1.1.1 miRNA的发现 | 第11页 |
| 1.1.2 miRNA的生成过程 | 第11-13页 |
| 1.1.3 miRNA的作用机制 | 第13页 |
| 1.2 miRNA参与非生物胁迫 | 第13-18页 |
| 1.2.1 miRNA与干旱胁迫 | 第13-15页 |
| 1.2.2 miRNA与盐和碱胁迫 | 第15-16页 |
| 1.2.3 miRNA与其他非生物胁迫 | 第16页 |
| 1.2.4 玉米干旱、盐和碱胁迫miRNA的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.3 miRNA在干旱和盐胁迫下的表达特性 | 第18页 |
| 1.4 miRNA的研究方法 | 第18-20页 |
| 1.4.1 文库构建 | 第18-19页 |
| 1.4.2 生物信息学分析 | 第19-20页 |
| 1.4.3 实时定量PCR | 第20页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第20-22页 |
| 2 植物材料准备与文库构建 | 第22-32页 |
| 2.1 实验材料、试剂与仪器 | 第22页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第22页 |
| 2.1.2 实验试剂及主要仪器 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-25页 |
| 2.2.1 玉米的种植 | 第22页 |
| 2.2.2 SRWC和LRWC的测定 | 第22-23页 |
| 2.2.3 玉米的处理方式 | 第23-24页 |
| 2.2.4 总RNA的提取 | 第24页 |
| 2.2.5 文库构建 | 第24-25页 |
| 2.3 结果与分析 | 第25-30页 |
| 2.3.1 玉米SRWC和LRWC随干旱时间的变化 | 第25-26页 |
| 2.3.2 干旱程度的分析 | 第26-27页 |
| 2.3.3 文库构建材料RNA的提取与质检 | 第27-28页 |
| 2.3.4 玉米miRNA文库的构建 | 第28-30页 |
| 2.4 讨论 | 第30页 |
| 2.5 小结 | 第30-32页 |
| 3 miRNA文库的生物信息学分析 | 第32-43页 |
| 3.1 生物信息学分析 | 第32-33页 |
| 3.2 文库分析 | 第33-41页 |
| 3.2.1 sRNA序列筛选与序列注释 | 第33-34页 |
| 3.2.2 已知miRNA和新miRNA的分析 | 第34-36页 |
| 3.2.3 miRNA差异表达分析 | 第36-39页 |
| 3.2.4 靶基因预测与分析 | 第39-41页 |
| 3.2.5 NAT-siRNA的预测 | 第41页 |
| 3.3 讨论 | 第41-42页 |
| 3.4 小结 | 第42-43页 |
| 4 多重胁迫下玉米内参基因的筛选与验证 | 第43-56页 |
| 4.1 实验材料、试剂与仪器 | 第44页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第44页 |
| 4.1.2 实验试剂及主要仪器 | 第44页 |
| 4.2 实验方法 | 第44-47页 |
| 4.2.1 植物材料处理方法 | 第44页 |
| 4.2.2 候选内参的选择和引物设计 | 第44-46页 |
| 4.2.3 总RNA提取及cDNA的合成 | 第46-47页 |
| 4.2.4 实时定量PCR反应 | 第47页 |
| 4.3 结果与分析 | 第47-54页 |
| 4.3.1 引物的扩增效率和特异性 | 第47-49页 |
| 4.3.2 内参基因表达分析 | 第49页 |
| 4.3.3 geNorm软件分析结果 | 第49-50页 |
| 4.3.4 NormFinder软件分析结果 | 第50-51页 |
| 4.3.5 BestKeeper软件分析结果 | 第51-53页 |
| 4.3.6 内参基因验证 | 第53-54页 |
| 4.4 讨论 | 第54-55页 |
| 4.5 小结 | 第55-56页 |
| 5 文库验证 | 第56-74页 |
| 5.1 实验试剂与仪器 | 第56页 |
| 5.2 实验方法 | 第56-59页 |
| 5.2.1 总RNA提取及cDNA的合成 | 第56页 |
| 5.2.2 miRNA和靶基因的引物设计 | 第56页 |
| 5.2.3 启动子分析 | 第56-59页 |
| 5.3 实验结果 | 第59-70页 |
| 5.3.1 RNA提取及引物检测 | 第59-60页 |
| 5.3.2 文库验证 | 第60-63页 |
| 5.3.3 miRNA和靶基因对干旱、盐和碱共胁迫的响应 | 第63-68页 |
| 5.3.4 miRNA和靶基因顺式作用元件分析 | 第68-70页 |
| 5.4 讨论 | 第70-73页 |
| 5.5 小结 | 第73-74页 |
| 结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-83页 |
| 附录A Marker | 第83-84页 |
| 附录B miRNA表达总图版 | 第84-85页 |
| 附录C 靶基因表达总图版 | 第85-86页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
