| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 第1章 引言 | 第13-24页 |
| 1.1 文献综述——膜整合焦磷酸酶的研究 | 第13-23页 |
| 1.1.1 膜PPase概述 | 第13页 |
| 1.1.2 膜PPase的类型 | 第13-16页 |
| 1.1.3 膜PPase的结构研究 | 第16页 |
| 1.1.4 膜PPase的转运机制 | 第16-18页 |
| 1.1.5 膜PPase的进化和特征残基 | 第18-22页 |
| 1.1.6 膜PPase的生物学意义及其在基因工程上的应用 | 第22-23页 |
| 1.2 本论文的研究目的及意义 | 第23-24页 |
| 第2章 CmPP的基因克隆及其重组大肠杆菌的抗盐性分析 | 第24-43页 |
| 2.1 材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1 宿主菌及载体 | 第24页 |
| 2.1.2 主要试剂和耗材 | 第24-26页 |
| 2.1.2.1 生化和分子生物学试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.2.2 常用试剂配制 | 第25-26页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第26页 |
| 2.2 方法 | 第26-34页 |
| 2.2.1 粪便基因组DNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.2 核酸琼脂糖凝胶电泳 | 第27-28页 |
| 2.2.3 DNA琼脂糖凝胶电泳纯化回收 | 第28页 |
| 2.2.4 质粒DNA提取 | 第28-29页 |
| 2.2.5 酶切产物的溶液纯化 | 第29-30页 |
| 2.2.6 大肠杆菌感受态细胞制备 | 第30页 |
| 2.2.7 大肠杆菌DNA转化 | 第30页 |
| 2.2.8 CmPP的基因扩增及其大肠杆菌表达载体的构建 | 第30-33页 |
| 2.2.8.1 CmPP基因的扩增 | 第30-31页 |
| 2.2.8.2 CmPP PCR产物的酶切 | 第31-32页 |
| 2.2.8.3 载体pET32a(+)的酶切 | 第32页 |
| 2.2.8.4 连接和转化 | 第32-33页 |
| 2.2.9 菌落PCR鉴定 | 第33页 |
| 2.2.10 重组质粒pET(CmPP)的提取和测序 | 第33页 |
| 2.2.11 CmPP生物信息学分析 | 第33页 |
| 2.2.12 CmPP重组大肠杆菌的抗盐性分析 | 第33-34页 |
| 2.3 结果与分析 | 第34-41页 |
| 2.3.1 CmPP基因的扩增 | 第34页 |
| 2.3.2 CmPP基因的克隆 | 第34-36页 |
| 2.3.3 CmPP基因的序列分析 | 第36-38页 |
| 2.3.4 CmPP蛋白的跨膜结构分析 | 第38-39页 |
| 2.3.5 CmPP蛋白的系统进化树分析 | 第39页 |
| 2.3.6 CmPP重组大肠杆菌的抗盐性分析 | 第39-41页 |
| 2.4 小结 | 第41-43页 |
| 第3章 CmPP重组酵母菌的抗盐性分析 | 第43-51页 |
| 3.1 材料 | 第43-44页 |
| 3.1.1 宿主菌及载体 | 第43页 |
| 3.1.2 主要试剂和耗材 | 第43-44页 |
| 3.1.2.1 生化和分子生物学试剂 | 第43页 |
| 3.1.2.2 常用试剂配制 | 第43-44页 |
| 3.2 实验方法 | 第44-47页 |
| 3.2.1 酵母感受态细胞制备 | 第44页 |
| 3.2.2 酵母表达载体pYES2(CmPP)的构建 | 第44-45页 |
| 3.2.3 重组质粒pYES2(CmPP)的酵母转化及鉴定 | 第45-46页 |
| 3.2.3.1 酵母转化 | 第45-46页 |
| 3.2.3.2 CmPP重组酵母菌的鉴定 | 第46页 |
| 3.2.4 CmPP重组酵母菌的抗盐分析 | 第46-47页 |
| 3.2.5 其它所用方法同于 2.2.3 | 第47页 |
| 3.3 结果与分析 | 第47-50页 |
| 3.3.1 酵母表达载体pYES2(CmPP)的构建 | 第47页 |
| 3.3.2 CmPP重组酵母菌的鉴定 | 第47-48页 |
| 3.3.3 CmPP重组酵母菌的抗盐性分析 | 第48-50页 |
| 3.4 小结 | 第50-51页 |
| 第4章 Cm PP转基因烟草植株的抗盐性分析 | 第51-75页 |
| 4.1 材料 | 第51-52页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第51页 |
| 4.1.2 主要试剂和耗材 | 第51-52页 |
| 4.1.2.1 生化和分子生物学试剂 | 第51页 |
| 4.1.2.2 激素与抗生素 | 第51页 |
| 4.1.2.3 培养基的配制 | 第51-52页 |
| 4.2 方法 | 第52-61页 |
| 4.2.1 植物基因组DNA的提取 | 第52-53页 |
| 4.2.2 烟草种子的消毒及无菌苗的培养 | 第53-54页 |
| 4.2.3 农杆菌感受态细胞的制备 | 第54页 |
| 4.2.4 CmPP植物转化载体的构建 | 第54-55页 |
| 4.2.4.1 插入片段CmPP(SS)的制备 | 第54-55页 |
| 4.2.4.2 载体片段pBI121(SS)的制备 | 第55页 |
| 4.2.4.3 连接、转化及鉴定 | 第55页 |
| 4.2.5 质粒pBI121(CmPP)转化农杆菌感受态细胞及转化子鉴定 | 第55-56页 |
| 4.2.6 用于转化烟草的农杆菌的培养 | 第56页 |
| 4.2.7 烟草叶盘法转化及转基因烟草的无菌培养 | 第56-57页 |
| 4.2.8 CmPP转基因烟草植株的鉴定 | 第57页 |
| 4.2.9 CmPP转基因烟草植株的室外培养 | 第57-58页 |
| 4.2.10 CmPP当代转基因烟草植株的抗盐性初步分析 | 第58页 |
| 4.2.11 CmPP转基因烟草子一代植株的盐胁迫实验 | 第58-59页 |
| 4.2.11.1 胁迫前烟草小植株的培育 | 第58页 |
| 4.2.11.2 盐胁迫下叶片失绿实验 | 第58页 |
| 4.2.11.3 盐胁迫下植株生长 | 第58-59页 |
| 4.2.12 测定指标及方法 | 第59-60页 |
| 4.2.12.1 干物质含量的测定 | 第59页 |
| 4.2.12.2 叶片丙二醛（MDA）含量的测定 | 第59页 |
| 4.2.12.3 电解质渗透率的测定 | 第59-60页 |
| 4.2.12.4 叶绿素含量的测定 | 第60页 |
| 4.2.12.5 根系活力的测定 | 第60页 |
| 4.2.12.6 数据处理 | 第60页 |
| 4.2.13 其它所用方法 | 第60-61页 |
| 4.3 结果与分析 | 第61-74页 |
| 4.3.1 CmPP植物转化载体的制备 | 第61-63页 |
| 4.3.2 CmPP基因的烟草叶盘法转化及无菌培养 | 第63-64页 |
| 4.3.3 CmPP转基因烟草植株的鉴定 | 第64-65页 |
| 4.3.4 CmPP转基因烟草植株的室外培养 | 第65-66页 |
| 4.3.5 CmPP当代转基因烟草植株的抗盐性初步分析 | 第66-68页 |
| 4.3.6 CmPP转基因烟草子一代植株的抗盐性分析 | 第68-74页 |
| 4.3.6.1 盐胁迫叶片失绿测试 | 第68页 |
| 4.3.6.2 盐胁迫下的植株生长 | 第68-69页 |
| 4.3.6.3 盐胁迫下干物质含量的变化 | 第69-71页 |
| 4.3.6.4 盐胁迫下总叶绿素含量的变化 | 第71-72页 |
| 4.3.6.5 盐胁迫下根系活力的变化 | 第72-73页 |
| 4.3.6.6 盐胁迫下MDA含量及电解质渗透率的变化 | 第73-74页 |
| 4.4 小结 | 第74-75页 |
| 第5章 总结与讨论 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-81页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文和研究成果 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
