| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词 | 第7-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-26页 |
| 1.1 壳聚糖酶概述 | 第11-14页 |
| 1.1.1 壳聚糖酶分类 | 第12-13页 |
| 1.1.2 壳聚糖酶产生菌 | 第13页 |
| 1.1.3 壳聚糖酶作用机理 | 第13-14页 |
| 1.2 壳聚糖酶的克隆表达 | 第14-16页 |
| 1.2.1 大肠杆菌表达系统 | 第15页 |
| 1.2.2 大肠杆菌表达系统的不足 | 第15-16页 |
| 1.3 提高外原蛋白在宿主细胞中表达量的方法 | 第16-20页 |
| 1.3.1 pHsh热激表达载体组成的Hsh表达系统 | 第16-17页 |
| 1.3.2 pHsh质粒载体改造 | 第17-18页 |
| 1.3.3 大肠杆菌密码子偏爱性 | 第18-19页 |
| 1.3.4 稀有密码子的优化 | 第19-20页 |
| 1.4 蛋白质结构建模 | 第20-21页 |
| 1.5 Biolog自动鉴定系统概述 | 第21-24页 |
| 1.5.1 Biolog自动鉴定系统概述 | 第21页 |
| 1.5.2 Biolog GEN Ⅲ microstation鉴定原理 | 第21-22页 |
| 1.5.3 Biolog GEN Ⅲ microstation鉴定过程 | 第22页 |
| 1.5.4 大肠杆菌碳氮源与抗生素的敏感试验研究 | 第22-24页 |
| 1.6 本论文的研究目的和意义 | 第24页 |
| 1.7 本论文的研究内容 | 第24-26页 |
| 第二章 重组壳聚糖酶（Csn）在大肠杆菌中的表达 | 第26-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-29页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第26页 |
| 2.1.2 实验材料 | 第26-28页 |
| 2.1.3 培养基及试剂 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-35页 |
| 2.2.1 枯草芽胞杆菌基因组DNA的提取 | 第29-30页 |
| 2.2.2 重组壳聚糖酶（Csn）基因的克隆 | 第30-31页 |
| 2.2.3 重组表达载体的构建 | 第31页 |
| 2.2.4 感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| 2.2.5 重组载体转化宿主菌 | 第32页 |
| 2.2.6 大肠杆菌阳性转化子的鉴定 | 第32-33页 |
| 2.2.7 重组蛋白的诱导表达 | 第33-34页 |
| 2.2.8 壳聚糖酶的分离纯化 | 第34页 |
| 2.2.9 SDS-PAGE | 第34-35页 |
| 2.3 实验结果 | 第35-39页 |
| 2.3.1 枯草芽孢杆菌基因组的提取 | 第35-36页 |
| 2.3.2 壳聚糖酶基因的克隆 | 第36-38页 |
| 2.3.3 重组表达载体的构建 | 第38页 |
| 2.3.4 阳性克隆子的鉴定 | 第38-39页 |
| 2.3.5 壳聚糖酶的SDS-PAGE电泳 | 第39页 |
| 2.4 结论 | 第39-40页 |
| 2.5 讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 壳聚糖酶的酶学性质研究 | 第42-52页 |
| 3.1 实验材料 | 第42-44页 |
| 3.1.1 实验仪器 | 第42-43页 |
| 3.1.2 实验试剂和培养基 | 第43-44页 |
| 3.1.3 实验材料 | 第44页 |
| 3.2 实验方法 | 第44-47页 |
| 3.2.1 胶体壳聚糖的制备 | 第44页 |
| 3.2.2 标准曲线的绘制 | 第44-45页 |
| 3.2.3 壳聚糖酶转化菌的诱导表达 | 第45页 |
| 3.2.4 壳聚糖酶粗酶液的制备及酶活测定 | 第45-46页 |
| 3.2.5 壳聚糖酶（Csn）的最适反应温度 | 第46页 |
| 3.2.6 壳聚糖酶（Csn）的最适反应pH | 第46页 |
| 3.2.7 壳聚糖酶（Csn）的热稳定性测定 | 第46-47页 |
| 3.2.8 壳聚糖酶（Csn）动力学常数Km值和Vmax值的测定 | 第47页 |
| 3.3 实验结果 | 第47-49页 |
| 3.3.1 壳聚糖酶Csn的最适反应温度 | 第47-48页 |
| 3.3.2 壳聚糖酶Csn的最适反应pH | 第48页 |
| 3.3.3 壳聚糖酶Csn的热稳定性 | 第48-49页 |
| 3.3.4 壳聚糖酶Km值和Vmax值 | 第49页 |
| 3.4 结论 | 第49-52页 |
| 第四章 蛋白质结构的同源建模和Biolog GEN Ⅲ分析 | 第52-66页 |
| 4.1 实验材料 | 第52-53页 |
| 4.1.1 实验仪器 | 第52页 |
| 4.1.2 实验试剂和培养基 | 第52-53页 |
| 4.2 实验方法 | 第53-55页 |
| 4.2.1 同源建模 | 第53页 |
| 4.2.2 Biolog GEN Ⅲ生物鉴定 | 第53-55页 |
| 4.3 结果分析 | 第55-62页 |
| 4.3.1 壳聚糖酶的同源建模 | 第55-56页 |
| 4.3.2 对重组大肠杆菌碳氮源和抗生素的利用结果分析 | 第56-62页 |
| 4.4 结论 | 第62-63页 |
| 4.5 讨论 | 第63-66页 |
| 第五章 总结及展望 | 第66-69页 |
| 5.1 总结 | 第66-67页 |
| 5.2 展望 | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-75页 |
