英文缩略词 | 第6-8页 |
中文摘要 | 第8-10页 |
英文摘要 | 第10-11页 |
1. 前言 | 第12-14页 |
2. 材料与方法 | 第14-28页 |
2.1 材料 | 第14-15页 |
2.1.1 病毒和细胞 | 第14页 |
2.1.2 试剂购置 | 第14页 |
2.1.3 仪器和设备 | 第14-15页 |
2.2 方法 | 第15-27页 |
2.2.1 配制溶液 | 第15-17页 |
2.2.2 RSV增殖及感染单位量测定 | 第17-18页 |
2.2.3 细胞培养与病毒接种 | 第18页 |
2.2.4 siRNA转染A549细胞与检测细胞转染效率 | 第18-19页 |
2.2.5 实验分组 | 第19页 |
2.2.6 TLR3,TLR7, IRF3, IRF7, IFN-α, IFN-β 在RSV感染组和siRNA沉默组的mRNA转录水平检测 | 第19-22页 |
2.2.6.1 A549细胞中总RNA提取 | 第20页 |
2.2.6.2 RNA定性与定量分析 | 第20页 |
2.2.6.3 两步RT-PCR方法检测 | 第20-22页 |
2.2.6.4 琼脂糖凝胶电泳检测PCR结果 | 第22页 |
2.2.7 A549细胞TLR3,TLR7蛋白的Western blot检测 | 第22-26页 |
2.2.7.1 总蛋白样本的制备 | 第22页 |
2.2.7.2 Lowry法蛋白定量 | 第22-24页 |
2.2.7.3 蛋白免疫印迹法检测TLR3,TLR7的蛋白表达 | 第24-26页 |
2.2.8 E L I S A法 检测A 54 9 细胞培养上清中的IFN-α,IFN-β,TNF-α,IL-1β 含量 | 第26-27页 |
2.3 统计学分析 | 第27-28页 |
3. 结果 | 第28-45页 |
3.1 病毒PFU检测 | 第28页 |
3.2 转染效率的检测和 siRNA 转染细胞后 mRNA 表达情况 | 第28-29页 |
3.3 检测RSV感染组和siRNA沉默组中TLR3、TLR7,IRF3,IRF7,IFN-α,IFN-β的m RNA转录水平 | 第29-37页 |
3.3.1 TLR3 mRNA在各组不同时间点的表达 | 第29-31页 |
3.3.2 TLR7 mRNA在各组不同时间点的表达 | 第31-32页 |
3.3.3 IRF3 mRNA在各组不同时间点的表达 | 第32-33页 |
3.3.4 IRF7 mRNA在各组不同时间点的表达 | 第33-35页 |
3.3.5 IFN-α mRNA在各组不同时间点的表达 | 第35-36页 |
3.3.6 IFN-β mRNA在各组不同时间点的表达 | 第36-37页 |
3.4 TLR3,TLR7蛋白在各组不同时间点蛋白的水平变化 | 第37-39页 |
3.4.1 TLR3在各组不同时间点的蛋白水平变化 | 第37-38页 |
3.4.2 TLR7在各组不同时间点的蛋白水平变化 | 第38-39页 |
3.5 ELISA检测A549细胞培养上清液IFN-α,IFN-β,TNF-α,IL-1β 的变化 | 第39-43页 |
3.6 空斑形成实验(PFU)检测各组细胞培养上清病毒滴度 | 第43-45页 |
4. 讨论 | 第45-48页 |
5. 结论 | 第48页 |
参考文献 | 第48-53页 |
附录 个人简历 | 第53-54页 |
致谢 | 第54-55页 |
综述 | 第55-62页 |
参考文献 | 第60-62页 |