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TLR3、TLR7受体在呼吸道合胞病毒感染A549细胞诱导Ⅰ型干扰素中的作用研究

英文缩略词第6-8页
中文摘要第8-10页
英文摘要第10-11页
1. 前言第12-14页
2. 材料与方法第14-28页
    2.1 材料第14-15页
        2.1.1 病毒和细胞第14页
        2.1.2 试剂购置第14页
        2.1.3 仪器和设备第14-15页
    2.2 方法第15-27页
        2.2.1 配制溶液第15-17页
        2.2.2 RSV增殖及感染单位量测定第17-18页
        2.2.3 细胞培养与病毒接种第18页
        2.2.4 siRNA转染A549细胞与检测细胞转染效率第18-19页
        2.2.5 实验分组第19页
        2.2.6 TLR3,TLR7, IRF3, IRF7, IFN-α, IFN-β 在RSV感染组和siRNA沉默组的mRNA转录水平检测第19-22页
            2.2.6.1 A549细胞中总RNA提取第20页
            2.2.6.2 RNA定性与定量分析第20页
            2.2.6.3 两步RT-PCR方法检测第20-22页
            2.2.6.4 琼脂糖凝胶电泳检测PCR结果第22页
        2.2.7 A549细胞TLR3,TLR7蛋白的Western blot检测第22-26页
            2.2.7.1 总蛋白样本的制备第22页
            2.2.7.2 Lowry法蛋白定量第22-24页
            2.2.7.3 蛋白免疫印迹法检测TLR3,TLR7的蛋白表达第24-26页
        2.2.8 E L I S A法 检测A 54 9 细胞培养上清中的IFN-α,IFN-β,TNF-α,IL-1β 含量第26-27页
    2.3 统计学分析第27-28页
3. 结果第28-45页
    3.1 病毒PFU检测第28页
    3.2 转染效率的检测和 siRNA 转染细胞后 mRNA 表达情况第28-29页
    3.3 检测RSV感染组和siRNA沉默组中TLR3、TLR7,IRF3,IRF7,IFN-α,IFN-β的m RNA转录水平第29-37页
        3.3.1 TLR3 mRNA在各组不同时间点的表达第29-31页
        3.3.2 TLR7 mRNA在各组不同时间点的表达第31-32页
        3.3.3 IRF3 mRNA在各组不同时间点的表达第32-33页
        3.3.4 IRF7 mRNA在各组不同时间点的表达第33-35页
        3.3.5 IFN-α mRNA在各组不同时间点的表达第35-36页
        3.3.6 IFN-β mRNA在各组不同时间点的表达第36-37页
    3.4 TLR3,TLR7蛋白在各组不同时间点蛋白的水平变化第37-39页
        3.4.1 TLR3在各组不同时间点的蛋白水平变化第37-38页
        3.4.2 TLR7在各组不同时间点的蛋白水平变化第38-39页
    3.5 ELISA检测A549细胞培养上清液IFN-α,IFN-β,TNF-α,IL-1β 的变化第39-43页
    3.6 空斑形成实验(PFU)检测各组细胞培养上清病毒滴度第43-45页
4. 讨论第45-48页
5. 结论第48页
参考文献第48-53页
附录 个人简历第53-54页
致谢第54-55页
综述第55-62页
    参考文献第60-62页

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