| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第9-21页 |
| 1.1 抗菌肽研究简述 | 第9-16页 |
| 1.1.1 抗菌肽的发现 | 第9页 |
| 1.1.2 抗菌肽的来源 | 第9-11页 |
| 1.1.3 抗菌肽的分类 | 第11-12页 |
| 1.1.4 抗菌肽生物活性的影响因素 | 第12-13页 |
| 1.1.5 抗菌肽在食品中的应用 | 第13-16页 |
| 1.2 植物防御素研究简述 | 第16-17页 |
| 1.2.1 植物防御素的结构特征 | 第16页 |
| 1.2.2 植物防御素的作用机理 | 第16-17页 |
| 1.3 基因定点突变技术 | 第17-19页 |
| 1.3.1 寡核苷酸引物介导的定点突变 | 第18页 |
| 1.3.2 PCR介导的定点突变 | 第18-19页 |
| 1.3.3 盒式突变 | 第19页 |
| 1.4 鳄梨源植物防御素PaDef简介 | 第19页 |
| 1.5 本课题的研究目的及意义 | 第19-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-27页 |
| 2.1.1 供试材料 | 第21-24页 |
| 2.1.2 培养基及相关母液的配制 | 第24-25页 |
| 2.1.3 Tricine-SDS-PAGE蛋白电泳试剂配制 | 第25页 |
| 2.1.4 Ni柱亲和纯化相关试剂配制 | 第25-26页 |
| 2.1.5 银染相关试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.6 其他试剂 | 第27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-37页 |
| 2.2.1 抗菌肽PaDef-WT诱导条件优化及抑菌活性研究 | 第27-32页 |
| 2.2.2 抗菌肽PaDef定点突变及相关试验 | 第32-35页 |
| 2.2.3 抗菌肽PaDef突变株筛选及活性验证 | 第35-36页 |
| 2.2.4 统计学分析 | 第36-37页 |
| 3 结果与讨论 | 第37-54页 |
| 3.1 抗菌肽PADEF野生型诱导条件优化及活性研究 | 第37-42页 |
| 3.1.1 诱导表达时间优化 | 第37-38页 |
| 3.1.2 诱导表达甲醇浓度优化 | 第38-39页 |
| 3.1.3 PaDef-WT目的蛋白的纯化 | 第39页 |
| 3.1.4 MIC(最小抑菌浓度) | 第39-40页 |
| 3.1.5 抑菌试验 | 第40-41页 |
| 3.1.6 温度、PH值、酶稳定性 | 第41-42页 |
| 3.2 抗菌肽PaDef定点突变及突变菌株的获得 | 第42-48页 |
| 3.2.1 PaDef的结构分析 | 第43-44页 |
| 3.2.2 PaDef与其他植物防御素多序列比对及定点突变 | 第44-45页 |
| 3.2.3 PCR扩增突变株质粒 | 第45页 |
| 3.2.4 突变菌株质粒双酶切EcoR Ⅰ/KpnⅠ验证及测序验证 | 第45-46页 |
| 3.2.5 突变菌株质粒线性化及电转毕赤酵母 | 第46-47页 |
| 3.2.6 突变株阳性克隆子筛选 | 第47-48页 |
| 3.3 抗菌肽PaDef突变株筛选及活性验证 | 第48-54页 |
| 3.3.1 高表达量突变株筛选 | 第48-49页 |
| 3.3.2 野生型与不同突变株蛋白表达量对比 | 第49-50页 |
| 3.3.3 不同突变株MIC(最小抑菌浓度)试验 | 第50-52页 |
| 3.3.4 不同突变株抑菌试验 | 第52-54页 |
| 4 结论 | 第54-55页 |
| 5 展望 | 第55-56页 |
| 6 参考文献 | 第56-64页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第64-65页 |
| 8 致谢 | 第65页 |
