| 中英文缩略词表 | 第7-9页 |
| 中文摘要 | 第9-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 第一部分 重组丁肝病毒抗原的构建和原核表达 | 第15-36页 |
| 1 前言 | 第15-16页 |
| 2 材料和方法 | 第16-20页 |
| 2.1 溶液和试剂 | 第16页 |
| 2.2 设备与仪器 | 第16页 |
| 2.3 操作步骤和方法 | 第16-20页 |
| 2.3.1 HDag基因的优化 | 第16-17页 |
| 2.3.2 表达载体HDag+pET43.1.a构建 | 第17-19页 |
| 2.3.3 重组蛋白的表达 | 第19-20页 |
| 3 结果 | 第20-32页 |
| 3.1 对原始序列进行优化 | 第20-25页 |
| 3.2 重组表达质粒的构建和鉴定 | 第25-29页 |
| 3.3 重组蛋白表达结果 | 第29-32页 |
| 4 讨论 | 第32-36页 |
| 第二部分 应用高密度细胞发酵技术表达重组丁肝抗原 | 第36-64页 |
| 1 前言 | 第36-37页 |
| 2 材料和方法 | 第37-42页 |
| 2.1 试剂和设备 | 第37页 |
| 2.2 质粒稳定性的测定实验 | 第37-38页 |
| 2.3 菌体OD600吸收值和菌体干重的等式关系 | 第38页 |
| 2.4 初始接种量的确定 | 第38页 |
| 2.5 培养基成分的确定 | 第38-39页 |
| 2.6 补料分批发酵过程中反馈调节控制的确定 | 第39-40页 |
| 2.7 重组蛋白表达诱导策略的确定 | 第40-41页 |
| 2.8 高密度细胞发酵技术应用于丁肝抗原的表达 | 第41-42页 |
| 3 结果 | 第42-61页 |
| 3.1 细菌干重和菌体600nm波长光吸收密度的关系 | 第42-43页 |
| 3.2 接种率对发酵过程的影响 | 第43-44页 |
| 3.3 选择适合高密度发酵的碳源和氮源 | 第44-49页 |
| 3.4 确定高密度发酵的反馈控制方式 | 第49-54页 |
| 3.5 确定高密度发酵诱导策略 | 第54-58页 |
| 3.6 高密度发酵应用于重组丁肝抗原的实例 | 第58-61页 |
| 4 讨论 | 第61-64页 |
| 第三部分 重组丁肝抗原的亲和纯化 | 第64-77页 |
| 1 前言 | 第64-65页 |
| 2 材料和方法 | 第65页 |
| 2.1 试剂和设备 | 第65页 |
| 3 蛋白纯化实验方法 | 第65-69页 |
| 3.1 重组蛋白的粗提纯 | 第65-66页 |
| 3.2 高盐浓度下的第一次亲和层析 | 第66-67页 |
| 3.3 低盐浓度下的第二次亲和层析 | 第67-68页 |
| 3.4 重组抗原的纯度和回收率 | 第68页 |
| 3.5 对纯化得到的重组蛋白进行抗原性鉴定 | 第68-69页 |
| 4 结果 | 第69-73页 |
| 4.1 高盐浓度下的第一次层析纯化 | 第69-70页 |
| 4.2 低盐浓度下的第二次层析纯化 | 第70-72页 |
| 4.3 计算整个过程的蛋白回收得率 | 第72页 |
| 4.4 Western blot验证纯化蛋白具有结合抗体的能力 | 第72-73页 |
| 5 讨论 | 第73-77页 |
| 第四部分 建立依赖于重组丁肝抗原的ELISA检测方法 | 第77-88页 |
| 1 前言 | 第77-78页 |
| 2 材料和方法 | 第78-81页 |
| 2.1 试剂和溶液 | 第78页 |
| 2.2 设备和仪器 | 第78页 |
| 2.3 测定的蛋白浓度 | 第78-79页 |
| 2.4 建立间接法测定IgG抗体 | 第79页 |
| 2.5 建立捕获法测定血清中的IgM抗体 | 第79-80页 |
| 2.6 确定两种方法的cut-off值 | 第80页 |
| 2.7 利用120份血清进行测定,判断方法的敏感性和特异性 | 第80-81页 |
| 3 结果 | 第81-84页 |
| 3.1 间接法测定IgG抗体 | 第81-82页 |
| 3.2 捕获法测定IgM的反应条件的确定 | 第82页 |
| 3.3 两种方法的cut-off值的确定 | 第82-83页 |
| 3.4 120份血清结果的判定 | 第83-84页 |
| 4 讨论 | 第84-88页 |
| 第五章 全文总结 | 第88-90页 |
| 5.1 本论文主要结论 | 第88页 |
| 5.2 该研究的创新点 | 第88-89页 |
| 5.3 尚待进一步解决的问题 | 第89-90页 |
| 综述 丁型肝炎病毒的分子生物学特性和研究进展 | 第90-97页 |
| 参考文献 | 第97-102页 |
| 致谢 | 第102-103页 |
| 附录1 | 第103-105页 |
| 附录2 | 第105-106页 |
| 个人简历 | 第106页 |
