| 符号说明 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-21页 |
| 1.1 鞘脂 | 第12-15页 |
| 1.1.1 鞘脂结构与功能 | 第12-13页 |
| 1.1.2 鞘脂代谢过程 | 第13-14页 |
| 1.1.3 鞘脂代谢关键酶 | 第14页 |
| 1.1.4 神经酰胺及神经酰胺酶 | 第14-15页 |
| 1.2 NO、冷信号与植物 | 第15-18页 |
| 1.2.1 NO在植物中的重要作用 | 第15-16页 |
| 1.2.2 低温对植物品质的影响 | 第16-17页 |
| 1.2.3 冷信号与NO交互作用对植物的调控作用 | 第17-18页 |
| 1.3 蛋白质的鉴定 | 第18-20页 |
| 1.3.1 蛋白质鉴定技术 | 第18-19页 |
| 1.3.2 iTRAQ技术的基本原理 | 第19-20页 |
| 1.3.3 iTRAQ技术的应用 | 第20页 |
| 1.4 研究内容及意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 仪器与试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.2 实验材料 | 第22页 |
| 2.1.3 菌株及质粒 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-40页 |
| 2.2.1 桃果实总蛋白的提取 | 第22-24页 |
| 2.2.2 总蛋白的iTRAQ检测 | 第24-25页 |
| 2.2.3 生物信息学分析 | 第25-26页 |
| 2.2.4 神经酰胺酶cDNA全长克隆及生物学分析 | 第26-34页 |
| 2.2.5 体外重组PPCDase蛋白 | 第34-38页 |
| 2.2.6 PPCDase基因表达量的检测 | 第38-39页 |
| 2.2.7 数据处理 | 第39-40页 |
| 3.结果与分析 | 第40-59页 |
| 3.1 桃果实总蛋白的iTRAQ检测 | 第40-49页 |
| 3.1.1 总蛋白分析 | 第40-45页 |
| 3.1.2 鞘脂代谢通路分析 | 第45-46页 |
| 3.1.3 鞘脂代谢关键酶分析 | 第46-48页 |
| 3.1.4 iTRAQ数据的重复性分析 | 第48-49页 |
| 3.2 神经酰胺酶全长cDNA的克隆 | 第49-51页 |
| 3.2.1 桃果实总RNA的提取及鉴定 | 第49页 |
| 3.2.2 PPCDase中间片段的克隆 | 第49-50页 |
| 3.2.3 RACE获取目的基因全长 | 第50-51页 |
| 3.3 PPCDase基因序列分析 | 第51-55页 |
| 3.3.1 PPCDase序列开放阅读框分析 | 第51-52页 |
| 3.3.2 PPCDase生物学分析 | 第52-55页 |
| 3.4 PPCDase重组蛋白表达 | 第55-57页 |
| 3.4.1 构建PPCDase克隆载体 | 第55-56页 |
| 3.4.2 PPCDase重组蛋白的表达和纯化 | 第56-57页 |
| 3.5 NO和冷信号对PPCDase基因表达的影响 | 第57-59页 |
| 4 讨论 | 第59-62页 |
| 4.1 桃果实总蛋白分析 | 第59页 |
| 4.2 NO和冷信号对鞘脂代谢关键酶含量的影响 | 第59-60页 |
| 4.3 桃果实PPCDase基因的克隆及生物学分析 | 第60页 |
| 4.4 PPCDase重组蛋白的表达 | 第60-61页 |
| 4.5 NO和冷信号对PPCDase基因表达量的影响 | 第61-62页 |
| 5 结论 | 第62-63页 |
| 6 创新之处 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 硕士期间论文发表情况 | 第79页 |
