摘要 | 第7-9页 |
ABSTRACT | 第9-10页 |
符号说明 | 第11-13页 |
第一章 综述 | 第13-19页 |
二、白斑综合征病毒 | 第14-15页 |
三、CSN研究进展 | 第15-17页 |
1. CSN的结构特点 | 第15页 |
2. CSN的功能研究 | 第15-17页 |
四、本论文的研究目的、意义和技术路线 | 第17-19页 |
第二章 COP9信号复合体不同亚基的克隆与组织分布与表达模式分析 | 第19-33页 |
一、前言 | 第19页 |
二、实验材料和方法 | 第19-24页 |
1. 材料 | 第19-21页 |
1.1 实验材料 | 第19-20页 |
1.2 组织分离 | 第20页 |
1.3 白斑综合征病毒的制备 | 第20页 |
1.4 试剂和仪器 | 第20-21页 |
2. 实验方法 | 第21-24页 |
2.1 总RNA的提取 | 第21页 |
2.2 第一链cDNA的合成 | 第21-22页 |
2.3 序列分析和系统进化分析基因克隆 | 第22页 |
2.4 实时荧光定量PCR | 第22-23页 |
2.5 半定量PCR | 第23-24页 |
三、结果 | 第24-31页 |
1. CSN序列比对和进化树分析 | 第24-29页 |
2. CSNs的组织分布分析 | 第29页 |
3. CSNs的表达模式分析 | 第29-31页 |
四、讨论 | 第31-33页 |
第三章 CSN5在日本囊对虾中表达和抗病毒功能研究 | 第33-52页 |
一、前言 | 第33-34页 |
二、实验材料和方法 | 第34-42页 |
1. 材料 | 第34-35页 |
1.1 实验材料 | 第34页 |
1.2 组织分离 | 第34-35页 |
2. 实验方法 | 第35-42页 |
2.1 CSN5的cDNA基因克隆 | 第35页 |
2.2 重组质粒表达 | 第35-37页 |
2.3 重组蛋白表达和纯化 | 第37-38页 |
2.4 CSN5抗体制备和检測 | 第38页 |
2.5 实时荧光定量PCR | 第38-39页 |
2.6 半定量 PCR(RT-PCR) | 第39-40页 |
2.7 蛋白免疫印记法 | 第40页 |
2.8 CSN5的干扰检测 | 第40-41页 |
2.9 过表达 | 第41页 |
2.10 细胞免疫化学实验 | 第41页 |
2.11 死亡率检验 | 第41-42页 |
三、实验结果 | 第42-50页 |
1. MjCSN5在对虾组织中分布 | 第42页 |
2. MjCSN5在病毒感染之后上调表达 | 第42-44页 |
3. 干扰敲降MjCSN5的表达后,病毒复制水平增加 | 第44-46页 |
4. CSN5重组蛋白过表达检测 | 第46-48页 |
5. CSN5提高了日本囊对虾的存活率 | 第48-49页 |
6. RNA干扰敲降MjCSN5后,Dorsal调控的抗菌肽的表达量下降 | 第49-50页 |
四、讨论 | 第50-52页 |
总结与创新 | 第52-53页 |
附录1 7种CSN亚基的cDNA序列和编码的氨基酸序列 | 第53-60页 |
附录2 7个CSN亚基的氨基酸序列和其他物种的氨基酸序列比对 | 第60-63页 |
附录3 CSN的7个亚基序列比对 | 第63-65页 |
参考文献 | 第65-71页 |
致谢 | 第71-72页 |
学位论文评阅及答辩情况表 | 第72页 |