| 摘要 | 第8-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-20页 |
| 1 CRISPR/Cas9系统简介 | 第9-14页 |
| 1.1 CRISPR/Cas9系统的来源及组成 | 第10-11页 |
| 1.2 CRISPR/Cas9系统的作用机制 | 第11-13页 |
| 1.3 CRISPR/Cas9系统的应用 | 第13-14页 |
| 2 谷子研究进展 | 第14-16页 |
| 2.1 谷子功能基因研究概况 | 第15页 |
| 2.2 谷子转基因技术研究进展 | 第15-16页 |
| 3 试验设计 | 第16-20页 |
| 3.1 根癌农杆菌介导的分子机制简介 | 第16页 |
| 3.2 植物PDS基因 | 第16-17页 |
| 3.3 植物幼穗转化方法简介 | 第17页 |
| 3.4 本试验研究的目的及意义 | 第17-18页 |
| 3.5 研究内容 | 第18-19页 |
| 3.6 技术路线 | 第19-20页 |
| 第二章 PDS-CRISPR/Cas9系统的构建 | 第20-36页 |
| 1 探索谷子PDS基因及确定靶位点 | 第20-21页 |
| 2 PDS-CRISPR/Cas9系统构建的材料及方法 | 第21-35页 |
| 2.1 PDS-CRISPR/Cas9系统构建的材料 | 第21页 |
| 2.2 PDS-CRISPR/Cas9系统构建的方法 | 第21-31页 |
| 2.2.1 Bbs Ⅰ酶切pBluescript_sk(+)-Osu6-sgRNA克隆载体 | 第24-25页 |
| 2.2.2 合成含有Bbs Ⅰ酶切粘性末端的靶序列双链 | 第25页 |
| 2.2.3 将靶序列插入Sk-Osu6-sgRNA载体中 | 第25-26页 |
| 2.2.4 检测Sk-Osu6-sgRNA-20 bp重组载体 | 第26-28页 |
| 2.2.5 将目标片段整合入pCAMBIA 1300植物表达载体中 | 第28-29页 |
| 2.2.6 检测pCAMBIA1300植物表达重组载体 | 第29-31页 |
| 2.3 PDS-CRISPR/Cas9系统构建的结果及分析 | 第31-35页 |
| 2.3.1 Sk-Osu6-sgRNA-20 bp重组载体PCR验证结果及分析 | 第31-32页 |
| 2.3.2 Sk-Osu6-sgRNA-20bp重组载体测序结果及分析 | 第32-33页 |
| 2.3.3 pCAMBIA1300重组载体酶切验证结果及分析 | 第33-34页 |
| 2.3.4 pCAMBIA1300重组载体测序验证结果及分析 | 第34-35页 |
| 3 PDS-CRISPR/Cas9系统构建结果讨论 | 第35-36页 |
| 第三章 谷子愈伤的遗传转化试验 | 第36-51页 |
| 1 谷子再生预试验 | 第36-41页 |
| 1.1 谷子再生预试验的材料及方法 | 第36-37页 |
| 1.1.1 谷子再生预试验的材料 | 第36页 |
| 1.1.2 谷子再生预试验的方法 | 第36页 |
| 1.1.3 外植体的获得和愈伤组织的诱导 | 第36页 |
| 1.1.4 愈伤组织的分化和再生 | 第36页 |
| 1.1.5 幼苗移土 | 第36-37页 |
| 1.2 谷子再生预试验结果及分析 | 第37-40页 |
| 1.2.1 谷子萌发试验结果及分析 | 第37页 |
| 1.2.2 谷子不同播种方式诱导愈伤的结果及分析 | 第37-38页 |
| 1.2.3 不同谷子品种愈伤及胚性愈伤诱导率结果及分析 | 第38-39页 |
| 1.2.4 愈伤组织分化的试验结果及分析 | 第39页 |
| 1.2.5 幼芽的生根结果及分析 | 第39-40页 |
| 1.3 谷子再生预试验结果讨论 | 第40-41页 |
| 2 愈伤的转化试验 | 第41-49页 |
| 2.1 谷子愈伤转化试验的材料 | 第41页 |
| 2.2 谷子愈伤转化试验的方法 | 第41-46页 |
| 2.2.1 愈伤的诱导和继代 | 第42页 |
| 2.2.2 愈伤的转化 | 第42-45页 |
| 2.2.3 愈伤的共培养 | 第45页 |
| 2.2.4 愈伤的恢复培养 | 第45-46页 |
| 2.2.5 愈伤的筛选 | 第46页 |
| 2.2.6 愈伤的选择再生 | 第46页 |
| 2.2.7 再生绿芽转移至选择生根培养基上 | 第46页 |
| 2.3 谷子愈伤转化试验结果及分析 | 第46-49页 |
| 2.3.1 转化愈伤筛选试验结果及分析 | 第46-47页 |
| 2.3.2 转化愈伤筛选分化试验结果及分析 | 第47-49页 |
| 3 谷子愈伤转化试验结果分析与讨论 | 第49-51页 |
| 第四章 谷子幼穗侵染转化试验 | 第51-56页 |
| 1 谷子幼穗侵染转化试验材料及方法 | 第51-55页 |
| 1.1 谷子幼穗侵染转化试验材料 | 第51页 |
| 1.2 谷子幼穗侵染转化试验方法 | 第51-55页 |
| 1.2.1 种植谷子超早熟品种 | 第51页 |
| 1.2.2 谷子幼穗侵染转化试验 | 第51-55页 |
| 2 谷子幼穗侵染转化试验分析及讨论 | 第55-56页 |
| 第五章 结论及讨论 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| ABSTRACT | 第62页 |
| 致谢 | 第64页 |
