| 摘要 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-19页 |
| 1 微藻研究进展 | 第10-11页 |
| 1.1 微藻的特点 | 第10-11页 |
| 1.2 盐藻概述 | 第11页 |
| 2 微藻基因工程 | 第11-12页 |
| 2.1 原核微藻基因工程 | 第11页 |
| 2.2 真核微藻基因工程 | 第11-12页 |
| 3 微藻基因工程载体元件 | 第12-14页 |
| 3.1 启动子 | 第12-13页 |
| 3.2 选择标记基因 | 第13-14页 |
| 4 微藻遗传转化方法 | 第14-16页 |
| 4.1 玻璃珠转化法 | 第14-15页 |
| 4.2 电击转化法 | 第15页 |
| 4.3 基因枪转化法 | 第15页 |
| 4.4 农杆菌介导法 | 第15页 |
| 4.5 PEG法 | 第15-16页 |
| 4.6 碳硅钎丝穿刺法 | 第16页 |
| 5 DGAT基因研究进展 | 第16-17页 |
| 5.1 植物DGATs及其编码基因的分类 | 第16页 |
| 5.2 微藻DGAT基因 | 第16-17页 |
| 6 本研究的目的意义 | 第17-18页 |
| 7 技术路线 | 第18-19页 |
| 第二章 杜氏盐藻的无菌培养体系 | 第19-28页 |
| 1 材料 | 第19页 |
| 1.1 实验仪器 | 第19页 |
| 1.2 藻种 | 第19页 |
| 1.3 培养基 | 第19页 |
| 1.4 主要试剂 | 第19页 |
| 2 方法 | 第19-21页 |
| 2.1 杜氏盐藻藻种的纯化 | 第19-20页 |
| 2.2 杜氏盐藻最佳波长的测定 | 第20页 |
| 2.3 杜氏盐藻生长曲线的绘制 | 第20页 |
| 2.4 杜氏盐藻生物量的测定方法 | 第20页 |
| 2.5 纸片扩散法检测细菌对抗生素的敏感性 | 第20-21页 |
| 2.6 纸片扩散法联合抑菌 | 第21页 |
| 2.7 藻细胞对抗生素的敏感性测定 | 第21页 |
| 3 结果分析 | 第21-26页 |
| 3.1 藻种纯化获得正确的杜氏盐藻藻株 | 第21页 |
| 3.2 杜氏盐藻最佳吸收波长的确定 | 第21-22页 |
| 3.3 绘制盐藻生长曲线 | 第22页 |
| 3.4 杜氏盐藻生物量的测定 | 第22-24页 |
| 3.5 盐藻培养液中细菌对抗生素的敏感性 | 第24-25页 |
| 3.6 纸片扩散法测定联合抑菌效果 | 第25页 |
| 3.7 杜氏盐藻细胞对抗生素的敏感性 | 第25页 |
| 3.8 优化的杜氏盐藻无菌培养体系 | 第25-26页 |
| 4 讨论 | 第26-27页 |
| 5 小结 | 第27-28页 |
| 第三章 VgDGAT1a-pCAMBIA3301表达载体的构建 | 第28-38页 |
| 1 材料 | 第28-29页 |
| 1.1 主要试剂 | 第28页 |
| 1.2 供试菌株和载体 | 第28页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第28-29页 |
| 1.4 常用培养基及试剂的配制 | 第29页 |
| 1.5 引物 | 第29页 |
| 2 VgDGATla-pCAMBIA3301植物表达载体的构建 | 第29-33页 |
| 2.1 感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| 2.2 质粒的转化及阳性克隆筛选 | 第30-31页 |
| 2.3 菌液的扩繁和质粒的小量提取 | 第31-32页 |
| 2.4 质粒的纯化回收 | 第32页 |
| 2.5 双酶切质粒及目的片段的回收 | 第32页 |
| 2.6 目的基因VgDGAT1a与pCAMBIA3301载体的连接 | 第32-33页 |
| 2.7 酶接产物的转化及阳性克隆的鉴定 | 第33页 |
| 2.8 VgDGAT1a-pCAMBIA3301酶连质粒的小量提取 | 第33页 |
| 2.9 载体VgDGAT1a-pCAMBIA3301的双酶切鉴定 | 第33页 |
| 3 结果分析 | 第33-37页 |
| 3.1 克隆载体PJET1.2和表达载体pCAMBIA3301阳性克隆的鉴定 | 第33-35页 |
| 3.2 VgDGAT1a-pCAMBIA3301表达载体的双酶切鉴定 | 第35-37页 |
| 4 讨论 | 第37页 |
| 5 小结 | 第37-38页 |
| 第四章 杜氏盐藻电击转化体系的建立 | 第38-49页 |
| 1 实验材料 | 第38页 |
| 1.1 主要试剂 | 第38页 |
| 1.2 主要仪器 | 第38页 |
| 1.3 藻种和质粒 | 第38页 |
| 2 实验方法 | 第38-42页 |
| 2.1 杜氏盐藻对草丁膦的耐受性实验 | 第38页 |
| 2.2 杜氏盐藻电击转化体系的建立 | 第38-39页 |
| 2.3 草丁膦抗性转化藻株的分子鉴定 | 第39-42页 |
| 3 结果分析 | 第42-47页 |
| 3.1 用于筛选阳性转化藻株的草丁膦最适浓度 | 第42-44页 |
| 3.2 电击法各转化参数的优化 | 第44-46页 |
| 3.3 草丁膦抗性转化株的鉴定 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-48页 |
| 5 小结 | 第48-49页 |
| 第五章 超表达VaDGAT1a杜氏盐藻的表型鉴定 | 第49-55页 |
| 1 实验材料 | 第49页 |
| 1.1 主要试剂 | 第49页 |
| 1.2 藻种 | 第49页 |
| 1.3 主要仪器 | 第49页 |
| 2 实验方法 | 第49-51页 |
| 2.1 转基因盐藻生物量的鉴定 | 第49页 |
| 2.2 盐藻中性脂含量的测定 | 第49-50页 |
| 2.3 转基因盐藻蛋白含量的测定 | 第50页 |
| 2.4 转基因盐藻细胞内类胡萝卜、素含量的测定 | 第50-51页 |
| 3 结果分析 | 第51-54页 |
| 3.1 转基因盐藻生物量的测定 | 第51页 |
| 3.2 盐藻尼罗红染色镜检结果 | 第51-52页 |
| 3.3 盐藻细胞内总脂含量的测定 | 第52-53页 |
| 3.4 盐藻细胞蛋白含量的测定 | 第53页 |
| 3.5 盐藻细胞类胡萝卜素含量的测定 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54页 |
| 5 小结 | 第54-55页 |
| 全文结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| Abstract | 第63页 |
| 致谢 | 第65页 |
