| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 主要符号 | 第11-12页 |
| 文献综述 | 第12-21页 |
| 1 弓形虫的生活史 | 第12-13页 |
| 2 弓形虫影响宿主免疫应答的研究 | 第13-16页 |
| 3 弓形虫疫苗的研究进展 | 第16-18页 |
| 4 弓形虫CDPKs的硏究进展 | 第18-20页 |
| 5 结语 | 第20-21页 |
| 引言 | 第21-22页 |
| 1 材料与方法 | 第22-37页 |
| ·材料 | 第22-26页 |
| ·虫株、菌株、载体和试验动物 | 第22页 |
| ·主要试剂(盒) | 第22页 |
| ·LB培养基的制备 | 第22页 |
| ·制备感受态细胞及转化所用的溶液 | 第22页 |
| ·核酸电泳相关试剂 | 第22-23页 |
| ·SDS-PAGE电泳所需溶液的配制 | 第23-24页 |
| ·蛋白诱导表达与纯化所需溶液 | 第24-25页 |
| ·免疫酶染试验所用溶液 | 第25页 |
| ·Western-blot试验所用溶液 | 第25页 |
| ·ELISA试验所用溶液 | 第25-26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·TgCDPK1-EF基因的克隆及生物信息学分析 | 第26-28页 |
| ·弓形虫RH株的复苏与复壮 | 第26页 |
| ·总RNA的提取及cDNA单链合成 | 第26页 |
| ·引物设计 | 第26-27页 |
| ·PCR扩增 | 第27页 |
| ·目的DNA片段的回收 | 第27页 |
| ·连接与转化 | 第27-28页 |
| ·重组质粒pMD-18T-TgCDPK1-EF的鉴定 | 第28页 |
| ·TgCDPK1-EF基因序列分析 | 第28页 |
| ·TgCDPK1-EF的原核表达与纯化 | 第28-31页 |
| ·pET-32a-TgCDPK1-EF重组质粒的构建 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第30页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的表达及SDS-PAGE电泳鉴定 | 第30页 |
| ·表达形式的分析 | 第30-31页 |
| ·重组蛋白诱导表达条件的优化 | 第31页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第31页 |
| ·TgCDPKl-EF蛋白的间接免疫酶化学染色试验 | 第31-32页 |
| ·免疫原的制备 | 第31页 |
| ·兔抗重组pET32a-TgCDPK1-EF蛋白免疫血清的制备 | 第31页 |
| ·间接免疫酶化学染色方法 | 第31-32页 |
| ·间接免疫酶化学染色条件优化 | 第32页 |
| ·重组蛋白诱导小鼠的免疫应答 | 第32-37页 |
| ·免疫原制备 | 第32页 |
| ·TgCDPK1-EF重组蛋白抗原性及免疫原性检测 | 第32-34页 |
| ·免疫相关基因mRNA表达水平的检测 | 第34-35页 |
| ·免疫小鼠的攻虫保护力试验 | 第35-37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-51页 |
| ·TgCDPK1-EF基因RT-PCR扩增 | 第37页 |
| ·TgCDPK1-EF基因测序结果与分析 | 第37-39页 |
| ·重组质粒的菌液PCR及双酶切鉴定 | 第39-40页 |
| ·重组蛋白表达鉴定 | 第40-41页 |
| ·重组蛋白表达形式分析 | 第41-42页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第42页 |
| ·重组表达蛋白免疫印迹结果(Western-blot) | 第42-43页 |
| ·免疫酶染实验条件优化 | 第43页 |
| ·弓形虫速殖子涂片间接免疫酶化学染色结果 | 第43-44页 |
| ·最佳抗原、抗体稀释度 | 第44页 |
| ·抗体滴度 | 第44页 |
| ·荧光定量PCR反应体系与条件优化 | 第44-45页 |
| ·荧光定量PCR标准曲线的建立 | 第45-48页 |
| ·小鼠免疫及攻虫后免疫相关因子的mRNA表达水平 | 第48-49页 |
| ·重组TgCDPK1-EF蛋白的免疫保护性 | 第49-51页 |
| 3 讨论 | 第51-55页 |
| ·TgCDPK1-EF的序列特征及外源表达 | 第51-52页 |
| ·利用间接免疫酶化学染色分析TgCDPK1在虫体的分布特征 | 第52页 |
| ·重组蛋白免疫及弓形速殖子腹腔感染对小鼠免疫因子表达的影响 | 第52-54页 |
| ·重组TgCDPK1-EF蛋白对小鼠的免疫保护力 | 第54-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简介 | 第62页 |
