绵羊边界病病毒的分离鉴定与抗体间接ELISA检测方法的建立
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 主要缩略语列表 | 第10-11页 |
| 文献综述 | 第11-22页 |
| 引言 | 第22-23页 |
| 1 材料与方法 | 第23-40页 |
| ·材料 | 第23-27页 |
| ·临床检测样品来源 | 第23页 |
| ·细胞、菌株和质粒载体 | 第23页 |
| ·血清和抗体 | 第23页 |
| ·主要试剂(盒) | 第23页 |
| ·实验动物 | 第23页 |
| ·试验相关溶液的配制 | 第23-26页 |
| ·主要仪器 | 第26-27页 |
| ·引物序列 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-40页 |
| ·临床样品瘟病毒检测 | 第27-30页 |
| ·BDV的分离与鉴定 | 第30-31页 |
| ·BDV分离株全基因组序列测定 | 第31-33页 |
| ·动物实验 | 第33页 |
| ·BDV-E2原核表达载体的构建 | 第33-35页 |
| ·BDV-E2重组蛋白的诱导表达及鉴定 | 第35-36页 |
| ·包涵体蛋白的纯化与鉴定 | 第36-37页 |
| ·间接ELISA检测方法的操作程序 | 第37-38页 |
| ·间接ELISA反应条件的优化 | 第38页 |
| ·ELISA临界值的确定 | 第38-39页 |
| ·特异性和重复性试验 | 第39页 |
| ·对比试验 | 第39-40页 |
| 2 结果与分析 | 第40-56页 |
| ·临床样品瘟病毒RT-PCR检测 | 第40页 |
| ·病毒的分离和鉴定 | 第40-41页 |
| ·病毒全基因组克隆与序列分析 | 第41-44页 |
| ·BDV分离株全基因组序列扩增 | 第41-42页 |
| ·JSLS12-01基因组序列分析 | 第42页 |
| ·5'-UTR和Npro基因系统进化分析 | 第42-44页 |
| ·动物实验 | 第44-46页 |
| ·被检羊的临床监测 | 第44-45页 |
| ·人工感染试验 | 第45-46页 |
| ·JSLS12-01 E2蛋白原核表达载体的构建 | 第46-47页 |
| ·E2基因扩增结果 | 第46页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第46-47页 |
| ·重组蛋白的诱导表达、鉴定及条件优化 | 第47-49页 |
| ·重组蛋白的初步诱导表达及鉴定 | 第47-48页 |
| ·诱导条件的优化 | 第48-49页 |
| ·重组蛋白的纯化及鉴定 | 第49-50页 |
| ·重组E2蛋白的纯化 | 第49页 |
| ·重组蛋白的Western-blot分析 | 第49-50页 |
| ·间接ELISA检测方法的建立 | 第50-55页 |
| ·最佳抗原包被浓度和血清稀释度的确定 | 第50-51页 |
| ·封闭液种类及封闭浓度的测定 | 第51页 |
| ·待检血清作用时间的确定 | 第51页 |
| ·酶标二抗浓度和作用时间的筛选 | 第51-52页 |
| ·TMB显色时间的测定 | 第52-53页 |
| ·ELISA临界值的确定 | 第53页 |
| ·特异性和重复性试验 | 第53页 |
| ·对比试验 | 第53-55页 |
| ·间接ELISA检测方法的初步应用 | 第55-56页 |
| 3 讨论 | 第56-61页 |
| ·JSLS12-01基因组特性和遗传进化分析 | 第56页 |
| ·重组E2蛋白的表达 | 第56-57页 |
| ·间接ELISA检测方法的建立 | 第57-58页 |
| ·持续性感染的危害性 | 第58-59页 |
| ·国内BDV的流行趋势 | 第59-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 个人简介 | 第72页 |
| 研究生期间发表论文 | 第72页 |
