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沉积微杆菌TPS/TPP基因的克隆、表达及酶学性质研究

摘要第1-10页
Abstract第10-12页
第一章 绪论第12-31页
   ·海藻糖的研究现状概述第12-19页
     ·海藻糖的理化性质第12-14页
     ·海藻糖在食品加工中的应用第14-15页
     ·海藻糖的生产制备第15-19页
   ·6-磷酸海藻糖合成酶研究概述第19-21页
   ·6-磷酸海藻糖磷酸酯酶研究概述第21-22页
   ·msTPS基因生物信息学分析第22-24页
   ·msTPP基因生物信息学分析第24-26页
   ·酶促反应动力学第26-28页
     ·底物浓度对酶反应速度的影响第26-27页
     ·米氏常数K_m第27-28页
     ·双倒数作图法测定K_m和V_(max)的值第28页
   ·研究意义及内容第28-31页
     ·研究意义第28-29页
     ·研究内容第29-31页
第二章 TPS编码基因的克隆、表达及其酶学性质研究第31-63页
   ·实验材料与仪器第31-33页
     ·菌株与质粒第31页
     ·试剂与工具酶第31-33页
     ·主要仪器第33页
   ·实验方法第33-51页
     ·培养基和部分溶液的配置第33-35页
     ·菌株在低温、高压条件下的培养第35-36页
     ·基因组DNA提取第36-37页
     ·msTPS编码基因扩增第37-39页
     ·PCR产物的纯化第39-40页
     ·载体pET-28a(+)的线性化第40-41页
     ·PCR产物与载体pET-28a(+)连接第41-42页
     ·E.coli DH5α及E.coli BL21感受态细胞的制备第42-43页
     ·重组质粒的转化与阳性克隆子的筛选第43-44页
     ·重组菌株构建与蛋白诱导表达第44页
     ·重组msTPS的分离纯化第44-49页
     ·重组msTPS酶活测定方法第49-50页
     ·重组msTPS酶学性质研究第50-51页
   ·结果与分析第51-61页
     ·基因组DNA的提取第51页
     ·TPS编码基因的扩增第51-52页
     ·PCR产物测序验证及纯化第52页
     ·载体pET-28a(+)的线性化第52-53页
     ·重组质粒TPS@pET-28a的构建第53-56页
     ·重组msTPS诱导表达及纯化第56-58页
     ·蛋白定量及重组菌株的酶表达量第58页
     ·重组msTPS酶学性质研究第58-61页
   ·本章小结第61-63页
第三章 TPP编码基因的克隆、表达及其酶学性质研究第63-83页
   ·实验材料与仪器第63-66页
     ·菌株与质粒第63页
     ·试剂与工具酶第63-65页
     ·主要仪器第65-66页
   ·实验方法第66-71页
     ·培养基和部分溶液的配置第66-67页
     ·菌株在低温、高压条件下的培养第67页
     ·基因组DNA提取第67页
     ·msTPP编码基因的扩增第67-68页
     ·PCR产物的纯化第68页
     ·载体pET-28a(+)的线性化第68页
     ·PCR产物与载体pET-28a(+)的连接第68页
     ·E.coli DH5α及E.coli BL21感受态细胞的制备第68-69页
     ·重组质粒的转化与阳性克隆子的筛选第69页
     ·重组菌株构建与蛋白诱导表达第69页
     ·重组msTPP的分离纯化第69-70页
     ·重组msTPP酶活测定第70页
     ·重组msTPP酶学性质研究第70-71页
   ·结果与分析第71-81页
     ·基因组DNA的提取第71-72页
     ·msTPP编码基因的扩增第72页
     ·PCR产物验证及纯化第72-73页
     ·载体pET-28a(+)的线性化第73页
     ·重组质粒TPP@pET-28a的构建第73-75页
     ·重组msTPP诱导表达及纯化第75-77页
     ·蛋白定量及重组菌株的酶表达量第77页
     ·重组msTPP酶学性质研究第77-81页
   ·本章小结第81-83页
第四章 总结与展望第83-87页
   ·总结第83-85页
   ·展望第85-87页
参考文献第87-94页
致谢第94-96页
附件第96-98页
 附件1:msTPS编码基因序列第96-97页
 附件2:msTPS氨基酸序列第97-98页
 附件3:msTPP编码基因序列第98页
 附件4:msTPP氨基酸序列第98页

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