| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-19页 |
| 1 CHO细胞表达系统 | 第10页 |
| 2 抗体融合蛋白 | 第10-12页 |
| 3 TNFR-Fc融合蛋白 | 第12-13页 |
| 4 蛋白聚合 | 第13-15页 |
| 5 未折叠蛋白反应 | 第15-17页 |
| 6 本研究的意义 | 第17-18页 |
| 7 技术路线 | 第18-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-32页 |
| 1 主要仪器 | 第19-20页 |
| 2 实验材料 | 第20-23页 |
| ·质粒、菌种与细胞株 | 第20页 |
| ·主要试剂与试剂盒 | 第20-21页 |
| ·常用试剂及配制方法 | 第21-23页 |
| 3 实验方法 | 第23-32页 |
| ·TNFR-Fc活性试验 | 第23页 |
| ·细菌培养与质粒大量抽提 | 第23-24页 |
| ·细胞培养 | 第24-25页 |
| ·细胞密度与活率测定 | 第25页 |
| ·质粒的转染 | 第25-26页 |
| ·细胞裂解 | 第26页 |
| ·PERK的抑制 | 第26页 |
| ·TNFR-Fc胞内胞外浓度测定 | 第26-27页 |
| ·TNFR-Fc活性的测定 | 第27页 |
| ·动力学参数计算及分析 | 第27-28页 |
| ·蛋白印迹 | 第28-29页 |
| ·TNFR-Fc的纯化 | 第29页 |
| ·尺寸排阻色谱 | 第29-30页 |
| ·Q-PCR | 第30-31页 |
| ·流式细胞技术检测瞬转效率 | 第31-32页 |
| 第三章 结果与分析 | 第32-51页 |
| 1 培养温度对TNFR-Fc聚合的影响 | 第32-36页 |
| ·培养温度对CHO细胞生长及TNFR-Fc表达量的影响 | 第32页 |
| ·不同培养温度条件下的TNFR-Fc聚合 | 第32-33页 |
| ·纯化后TNFR-Fc的聚合 | 第33-35页 |
| ·培养温度对TNFR-Fc活性的影响 | 第35-36页 |
| 2 温度对TNFR-Fc的折叠速率及有关调控蛋白的影响 | 第36-42页 |
| ·培养温度对细胞大小的影响 | 第36-37页 |
| ·培养温度对TNFR-Fc的折叠速率的影响 | 第37-39页 |
| ·培养温度对相关调控蛋白mRNA含量的影响 | 第39-40页 |
| ·培养温度对PERK表达及调控的影响 | 第40-42页 |
| 3 PERK抑制对TNFR-Fc聚合的影响 | 第42-46页 |
| ·PERK抑制对eIF2a磷酸化的影响 | 第42-43页 |
| ·PERK抑制对TNFR-Fc合成和分泌的影响 | 第43页 |
| ·PERK抑制对TNFR-Fc聚合的影响 | 第43-46页 |
| 4 PERK过表达对TNFR-Fc聚合的影响 | 第46-51页 |
| ·过表达PERK质粒的构建 | 第46-47页 |
| ·重组质粒转染CHO细胞 | 第47-48页 |
| ·质粒转染效率的测定 | 第48页 |
| ·瞬转细胞中PERK的mRNA水平 | 第48-49页 |
| ·PERK过表达对eIF2a磷酸化的影响 | 第49页 |
| ·PERK过表达对TNFR-Fc聚合的影响 | 第49-51页 |
| 第四章 讨论 | 第51-53页 |
| 第五章 结论与展望 | 第53-54页 |
| 1 结论 | 第53页 |
| 2 研究的主要创新点 | 第53页 |
| 3 展望 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-63页 |
| 在学期间发表论文清单 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64页 |