| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 英文缩略词表 | 第8-10页 |
| 实验技术路线 | 第10-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-40页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)概述 | 第14-17页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征简介 | 第14-15页 |
| ·高致病性猪繁殖与呼吸综合征危害与防治 | 第15-17页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)概述 | 第17-22页 |
| ·PRRSV结构 | 第17-19页 |
| ·PRRSV入侵与复制机理 | 第19-21页 |
| ·抗PRRSV研究进展 | 第21-22页 |
| ·HDAC6蛋白的研究进展 | 第22-25页 |
| ·HDAC6基因结构与蛋白结构 | 第22-23页 |
| ·HDAC6信号通路与生物学功能 | 第23-24页 |
| ·HDAC6蛋白抵抗病毒入侵 | 第24-25页 |
| ·基因编辑技术的研究进展 | 第25-31页 |
| ·基因打靶技术简介 | 第25-26页 |
| ·ZFNs介导的基因打靶技术研究进展 | 第26-28页 |
| ·TALENs与CRISPR/Cas9基因打靶技术简介 | 第28-31页 |
| ·Leptin基因的研究进展 | 第31-38页 |
| ·Leptin基因信号通路与生物学功能 | 第31-33页 |
| ·Leptin基因与肥胖疾病 | 第33-35页 |
| ·猪作为生物模型的医学应用简介 | 第35-38页 |
| ·本课题的研究意义与可行性分析 | 第38-40页 |
| ·抗蓝耳病转基因猪的研究意义及可行性分析 | 第38页 |
| ·肥胖疾病模型猪的研究意义及可行性分析 | 第38-40页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第40-64页 |
| ·实验材料 | 第40-45页 |
| ·实验猪及细胞系 | 第40页 |
| ·实验菌株、毒株及质粒 | 第40页 |
| ·实验仪器及耗材 | 第40-41页 |
| ·常用试剂及抗体 | 第41-43页 |
| ·常用培养基及溶液配制 | 第43-44页 |
| ·实验数据分析相关软件 | 第44-45页 |
| ·实验方法 | 第45-64页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第45页 |
| ·感受态细胞的转化 | 第45-46页 |
| ·质粒提取 | 第46-48页 |
| ·PCR、酶切产物回收与连接 | 第48页 |
| ·连接反应 | 第48-49页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第49-50页 |
| ·PCR反应体系及条件 | 第50页 |
| ·猪组织和细胞总RNA提取 | 第50-51页 |
| ·RNA反转录 | 第51页 |
| ·定量PCR | 第51-52页 |
| ·猪组织与细胞蛋白提取 | 第52-53页 |
| ·ELISA检测血清中蛋白表达量 | 第53-54页 |
| ·Western Blot | 第54-56页 |
| ·猪胎儿成纤维细胞系的建立 | 第56页 |
| ·猪胎儿成纤维细胞的电击转染 | 第56-57页 |
| ·猪胎儿成纤维细胞转染后的筛选 | 第57页 |
| ·基因修饰克隆猪的生产 | 第57-58页 |
| ·PRRSV活体攻毒试验设计、临床观察及采样 | 第58-59页 |
| ·猪肺泡巨噬细胞PRRSV攻毒实验 | 第59页 |
| ·病毒量检测 | 第59-60页 |
| ·HE染色 | 第60-61页 |
| ·免疫组织化学 | 第61-62页 |
| ·小型猪MS-CT检测 | 第62页 |
| ·小型猪血液样本采集以及生理生化指标的测定 | 第62页 |
| ·猪IVGTT及OGTT检测糖耐量实验方法 | 第62-63页 |
| ·引物合成、基因测序 | 第63-64页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第64-113页 |
| ·HDAC6转基因猪家系的建立 | 第64-74页 |
| ·p-CMV-HDAC6表达载体的构建 | 第64-65页 |
| ·成纤维细胞核移植及转基因猪的生产 | 第65-66页 |
| ·F_0代HDAC6转基因猪检测及传代 | 第66-69页 |
| ·F_1代HDAC6转基因猪检测 | 第69-73页 |
| ·结果分析与讨论 | 第73-74页 |
| ·PRRSV体外感染HDAC6转基因猪肺泡巨噬细胞攻毒试验 | 第74-80页 |
| ·F_1代HDAC6转基因猪肺泡巨噬细胞系的建立 | 第74-76页 |
| ·PRRSV体外感染PAMs细胞攻毒试验 | 第76-78页 |
| ·结果分析与讨论 | 第78-80页 |
| ·PRRSV感染HDAC6转基因猪活体攻毒试验 | 第80-97页 |
| ·PRRSV感染HDAC6转基因猪攻毒实验 | 第80-94页 |
| ·PRRSV感染HDAC6转基因猪同居实验 | 第94-95页 |
| ·结果分析与讨论 | 第95-97页 |
| ·Leptin基因敲除猪家系的建立 | 第97-113页 |
| ·敲除Leptin基因锌指核酸酶打靶载体的构建与细胞筛选 | 第97-100页 |
| ·成纤维细胞核移植及F_0代转基因敲除猪的生产 | 第100-102页 |
| ·F_0代Leptin基因敲除猪检测及传代 | 第102-104页 |
| ·F_1代Leptin基因敲除猪检测及传代 | 第104-106页 |
| ·小型猪肥胖疾病模型的建立 | 第106-111页 |
| ·结果分析与讨论 | 第111-113页 |
| 第四章 结论与展望 | 第113-115页 |
| ·结论 | 第113-114页 |
| ·HDAC6转基因抗病猪家系的建立 | 第113页 |
| ·HDAC6蛋白的过表达起到了抵抗PRRSV入侵效果 | 第113页 |
| ·锌指核酸酶介导的Leptin基因定点修饰猪的生产 | 第113页 |
| ·Leptin基因敲除猪肥胖疾病模型家系的建立 | 第113-114页 |
| ·展望 | 第114-115页 |
| 参考文献 | 第115-129页 |
| 附录 | 第129-149页 |
| 附录1 利用ZFNs/TALENs新技术敲除MSTN基因 | 第129-134页 |
| 附录2 第三章所使用引物名称及序列 | 第134-136页 |
| 附录3 猪HDAC6基因CDS序列信息 | 第136-138页 |
| 附录4 p-CMV-HDAC6载体结构示意图以及序列信息 | 第138-142页 |
| 附录5 ZFNs载体结构示意图 | 第142-146页 |
| 附录6 Porcine Leptin基因信息 | 第146-149页 |
| 致谢 | 第149-150页 |
| 个人简历 | 第150页 |
