| 摘要 | 第1-9页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 综述 | 第10-17页 |
| 1 IBV病原学 | 第10-13页 |
| ·IBV基因组结构 | 第10-11页 |
| ·IBV编码的结构蛋白及其生物学功能 | 第11-13页 |
| ·纤突蛋白(S) | 第11-12页 |
| ·膜糖蛋白(M) | 第12页 |
| ·核衣壳蛋白(N) | 第12-13页 |
| ·小膜蛋白(E) | 第13页 |
| 2 IBV的生物学和理化特性 | 第13-14页 |
| 3 流行病学 | 第14页 |
| 4 IBV的单克隆抗体 | 第14-15页 |
| 5 研究目的和意义 | 第15-17页 |
| 第一章 抗山西分离株IBV抗体间接ELISA方法的建立 | 第17-27页 |
| 1 实验材料 | 第17-18页 |
| ·病毒、血清及实验动物 | 第17页 |
| ·主要仪器设备 | 第17-18页 |
| ·主要试剂 | 第18页 |
| ·相关试剂配制 | 第18页 |
| 2 方法 | 第18-21页 |
| ·病毒增值 | 第18-19页 |
| ·病毒提纯及蛋白含量的测定 | 第19页 |
| ·动物免疫 | 第19页 |
| ·检测IBV抗体间接ELISA方法的建立 | 第19-20页 |
| ·最佳抗原包被浓度及血清稀释度的确定 | 第19-20页 |
| ·最佳包被条件的确定 | 第20页 |
| ·最佳一抗反应时间的确定 | 第20页 |
| ·最佳二抗反应时间的确定 | 第20页 |
| ·底物液反应时间的确定 | 第20页 |
| ·间接ELISA阴、阳性临界值的确定 | 第20页 |
| ·间接ELISA重复性、敏感性、特异性的确定 | 第20-21页 |
| ·间接ELISA的重复性试验 | 第20-21页 |
| ·间接ELISA的敏感性试验 | 第21页 |
| ·间接ELISA的特异性试验 | 第21页 |
| 3 结果与分析 | 第21-25页 |
| ·病毒增殖 | 第21-22页 |
| ·IBV抗原的纯化 | 第22页 |
| ·间接ELISA抗体检测方法的优化结果 | 第22-24页 |
| ·最佳抗原包被浓度及血清稀释度的优化结果 | 第22-23页 |
| ·最适包被条件的确定 | 第23页 |
| ·抗原抗体最佳反应时间的优化 | 第23页 |
| ·与酶结合物作用时间的优化 | 第23-24页 |
| ·底物最适反应时间 | 第24页 |
| ·临界值的确定 | 第24页 |
| ·间接ELISA重复性、敏感性、特异性的确定 | 第24-25页 |
| ·间接ELISA的重复性试验 | 第24页 |
| ·敏感性试验 | 第24-25页 |
| ·特异性试验 | 第25页 |
| 4 讨论 | 第25-27页 |
| 第二章 抗IBV野毒株单克隆抗体的制备与鉴定 | 第27-41页 |
| 1 试验材料 | 第27-28页 |
| ·病毒株、细胞及实验动物 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27页 |
| ·主要仪器设备 | 第27-28页 |
| ·常用试剂的配制 | 第28页 |
| 2 单抗的制备 | 第28-33页 |
| ·动物免疫 | 第28-29页 |
| ·细胞融合 | 第29-31页 |
| ·制备脾细胞悬液 | 第29页 |
| ·SP2/0细胞的制备 | 第29页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第29-30页 |
| ·融合方法 | 第30-31页 |
| ·杂交瘤细胞株的筛选 | 第31页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的克隆 | 第31页 |
| ·阳性杂交瘤细胞冻存与复苏 | 第31-32页 |
| ·杂交瘤细胞冻存 | 第31-32页 |
| ·阳性杂交瘤细胞复苏 | 第32页 |
| ·单克隆抗体的大量制备及测定腹水的效价 | 第32页 |
| ·杂交瘤细胞及单克隆抗体的鉴定 | 第32-33页 |
| ·单克隆抗体亚类鉴定 | 第32页 |
| ·间接ELISA检测单克隆抗体的特异性 | 第32页 |
| ·杂交瘤细胞稳定性测定 | 第32-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-37页 |
| ·小鼠血清效价的测定 | 第33页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第33-35页 |
| ·SP2/0细胞的制备 | 第33-34页 |
| ·细胞融合 | 第34-35页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选 | 第35页 |
| ·单克隆抗体腹水抗体效价的测定 | 第35-36页 |
| ·杂交瘤细胞及单克隆抗体的鉴定 | 第36-37页 |
| ·单克隆抗体亚类及亚型鉴定 | 第36页 |
| ·间接ELISA检测单克隆抗体的特异性 | 第36-37页 |
| ·杂交瘤细胞稳定性测定 | 第37页 |
| 4 讨论 | 第37-41页 |
| ·抗原的制备 | 第37页 |
| ·动物免疫 | 第37页 |
| ·单克隆抗体的制备与鉴定 | 第37-38页 |
| ·筛选方法的建立 | 第38-39页 |
| ·杂交瘤细胞的克隆化和冻存 | 第39页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第39-41页 |
| 结论 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-46页 |
| Abstract | 第46-48页 |
| 致谢 | 第48页 |