| 摘要 | 第1-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-17页 |
| 1 植物抗旱相关转录因子研究进展 | 第10-13页 |
| ·植物抗旱机制 | 第11页 |
| ·植物抗旱相关转录因子 | 第11-12页 |
| ·植物锌指蛋白 | 第12-13页 |
| 2 植物抗旱基因工程研究进展 | 第13-15页 |
| ·拟南芥遗传转化研究进展 | 第13-14页 |
| ·大豆遗传转化研究进展 | 第14-15页 |
| ·影响大豆体细胞胚胎发生的主要因素 | 第14-15页 |
| ·大豆体细胞胚胎再生体系遗传转化方法 | 第15页 |
| 3 本试验目的与意义 | 第15-16页 |
| 4 创新及技术路线 | 第16-17页 |
| 第二章 大豆GmZFP4基因序列特征分析 | 第17-28页 |
| 1 试验材料 | 第17页 |
| ·植物材料 | 第17页 |
| ·供试菌株和质粒载体 | 第17页 |
| ·主要分子生物学及生化试剂 | 第17页 |
| ·常用培养基 | 第17页 |
| 2 试验方法 | 第17-22页 |
| ·大豆基因组DNA提取 | 第18页 |
| ·CTAB法提取大豆基因组DNA | 第18页 |
| ·电泳检测 | 第18页 |
| ·GmZFP4基因PCR引物设计及反应体系建立 | 第18-19页 |
| ·凝胶电泳检测及切胶回收测序 | 第19-20页 |
| ·大肠杆菌菌种活化及感受态细胞制备 | 第20页 |
| ·T-A克隆 | 第20-21页 |
| ·菌液测序 | 第21-22页 |
| ·小提质粒 | 第21-22页 |
| ·凝胶电泳及检测 | 第22页 |
| 3 试验结果与分析 | 第22-27页 |
| ·大豆基因组DNA提取电泳检测 | 第22页 |
| ·大豆GmZFP4 gDNA PCR扩增及纯化 | 第22-26页 |
| ·PCR扩增电泳 | 第22-23页 |
| ·PCR产物纯化 | 第23页 |
| ·测序结果及生物信息学分析 | 第23-26页 |
| ·大豆GmZFP4基因cDNA克隆 | 第26页 |
| ·T-A克隆结果 | 第26-27页 |
| 4 讨论 | 第27-28页 |
| 第三章 大豆GmZFP4基因过表达载体构建及转化研究 | 第28-43页 |
| 1 试验材料 | 第28-30页 |
| ·植物材料 | 第28页 |
| ·质粒载体和供试菌株 | 第28页 |
| ·常用培养基 | 第28-29页 |
| ·微生物培养基 | 第28页 |
| ·植物培养基 | 第28-29页 |
| ·相关试剂 | 第29-30页 |
| ·表达载体构建图谱 | 第30页 |
| 2 试验方法 | 第30-37页 |
| ·植物表达载体35S：GmZFP4的构建 | 第30-35页 |
| ·碱裂解法提取pMD18-T-GmZFP4质粒 | 第30-32页 |
| ·目的基因扩增和产物纯化 | 第32页 |
| ·pMD18-T-GmZFP4基因和pBI121载体的酶切与纯化 | 第32-33页 |
| ·目的基因与pBI121载体连接及转化 | 第33-34页 |
| ·35S：GmZFP4表达载体转化农杆菌EHA105 | 第34-35页 |
| ·农杆菌介导的拟南芥转化 | 第35-37页 |
| ·受体材料的种植 | 第35页 |
| ·浸花法转化拟南芥 | 第35-36页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第36-37页 |
| 3 试验结果与分析 | 第37-42页 |
| ·pMD18-T-GmZFP4质粒PCR | 第37-38页 |
| ·表达载体转化大肠杆菌菌落PCR鉴定 | 第38-39页 |
| ·表达载体转化农杆菌EHA105菌落PCR阳性检测 | 第39页 |
| ·转基因拟南芥阳性苗的筛选及移苗 | 第39-41页 |
| ·转基因拟南芥PCR鉴定 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-43页 |
| 第四章 大豆愈伤组织培养优化研究 | 第43-49页 |
| 1 供试材料 | 第43-44页 |
| ·植物材料 | 第43页 |
| ·药品及试剂配制 | 第43页 |
| ·培养基 | 第43-44页 |
| 2 试验方法 | 第44-45页 |
| ·未成熟豆荚的收集和消毒 | 第44页 |
| ·外植体的准备和接种 | 第44页 |
| ·植物再生 | 第44-45页 |
| 3 试验结果与分析 | 第45-47页 |
| ·大豆组培愈伤组织生成 | 第45-46页 |
| ·2,4-D浓度对大豆胚性愈伤组织诱导的影响 | 第45页 |
| ·大豆愈伤组织生成 | 第45-46页 |
| ·体细胞胚的萌发及植株再生 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-49页 |
| 第五章 全文结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| Abstract | 第54-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
