| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-21页 |
| ·真菌的次级代谢 | 第11-12页 |
| ·次级代谢及次级代谢产物 | 第11页 |
| ·真菌次级代谢产物 | 第11-12页 |
| ·真菌遗传转化方法 | 第12-15页 |
| ·PEG-CaC12 转化法 | 第12-13页 |
| ·电激转化法 | 第13页 |
| ·醋酸锂转化法 | 第13页 |
| ·基因枪转化法 | 第13-14页 |
| ·转座子介导的真菌遗传转化 | 第14页 |
| ·限制性内切酶介导的真菌遗传转化(REMI) | 第14-15页 |
| ·农杆菌介导的真菌遗传转化系统(ATMT) | 第15页 |
| ·农杆菌介导丝状真菌遗传转化的研究进展 | 第15-19页 |
| ·根癌农杆菌介导丝状真菌转化的机制 | 第15-16页 |
| ·农杆菌介导真菌遗传转化的优点 | 第16-17页 |
| ·影响农杆菌介导的丝状真菌遗传转化效率的因素 | 第17-19页 |
| ·农杆菌介导的丝状真菌遗传转化在真菌功能基因研究中的应用 | 第19页 |
| ·本研究的目的意义及技术路线 | 第19-21页 |
| ·本研究的目的意义 | 第19页 |
| ·本研究的主要内容 | 第19-20页 |
| ·技术路线 | 第20-21页 |
| 第2章 质粒和菌株的构建 | 第21-32页 |
| ·材料和仪器 | 第21-25页 |
| ·菌株、质粒及引物 | 第21-23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| ·主要培养基 | 第23-25页 |
| ·实验方法 | 第25-28页 |
| ·分子生物学相关实验方法 | 第25页 |
| ·实验中使用的试剂盒 | 第25-26页 |
| ·pulAc43 质粒的保存 | 第26页 |
| ·pCAM-ble 质粒构建和保存 | 第26-27页 |
| ·pCAM-ble 质粒的验证 | 第27-28页 |
| ·结果与分析 | 第28-31页 |
| ·pCAM-ble 质粒的构建 | 第28-29页 |
| ·pCAM-ble 质粒验证 | 第29-31页 |
| ·本章小结 | 第31-32页 |
| 第3章 农杆菌介导灰黄青霉的转化 | 第32-50页 |
| ·材料和仪器 | 第32-34页 |
| ·菌株及引物 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32-33页 |
| ·主要仪器 | 第33页 |
| ·主要培养基 | 第33-34页 |
| ·实验菌株保存方法 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-38页 |
| ·筛选转化子所需博莱霉素浓度的确定 | 第34-35页 |
| ·抑制农杆菌生长所需头孢霉素浓度的确定 | 第35页 |
| ·农杆菌EHA105 的活化和诱导培养 | 第35页 |
| ·灰黄青霉孢子的培养 | 第35页 |
| ·农杆菌转化灰黄青霉过程 | 第35-36页 |
| ·假定转化子的遗传稳定性分析 | 第36页 |
| ·灰黄青霉菌丝体的培养和收集 | 第36页 |
| ·灰黄青霉基因组DNA 的提取 | 第36-37页 |
| ·假定转化子的T-DNA 插入的PCR 检测和性状变化的筛选 | 第37-38页 |
| ·结果与分析 | 第38-48页 |
| ·筛选转化子所需博莱霉素浓度的确定 | 第38-40页 |
| ·抑制农杆菌生长所需头孢霉素浓度的确定 | 第40-41页 |
| ·农杆菌介导的灰黄青霉转化体系的优化 | 第41-47页 |
| ·假定转化子基因组的PCR 验证 | 第47-48页 |
| ·转化子的遗传稳定性分析 | 第48页 |
| ·不同性状突变子的筛选 | 第48页 |
| ·本章小结 | 第48-50页 |
| 第4章 农杆菌介导产黄青霉的转化 | 第50-61页 |
| ·材料和仪器 | 第50-51页 |
| ·菌株及引物 | 第50页 |
| ·主要试剂 | 第50页 |
| ·主要仪器 | 第50页 |
| ·主要培养基 | 第50-51页 |
| ·产黄青霉菌种的保存 | 第51页 |
| ·实验方法 | 第51-52页 |
| ·筛选转化子所需博莱霉素浓度的确定 | 第51页 |
| ·抑制农杆菌生长所需头孢霉素浓度的确定 | 第51页 |
| ·农杆菌EHA105 的活化和诱导培养 | 第51页 |
| ·产黄青霉孢子的准备 | 第51-52页 |
| ·农杆菌转化产黄青霉 | 第52页 |
| ·假定转化子的遗传稳定性分析 | 第52页 |
| ·产黄青霉菌丝体的培养和收集 | 第52页 |
| ·假定转化子的T-DNA 插入的PCR 检测 | 第52页 |
| ·不同农杆菌菌株介导的转化 | 第52页 |
| ·结果与分析 | 第52-59页 |
| ·筛选转化子所需博莱霉素浓度的确定 | 第52-54页 |
| ·农杆菌介导的产黄青霉转化体系的优化 | 第54-58页 |
| ·假定转化子基因组的PCR 验证 | 第58-59页 |
| ·转化子的遗传稳定性分析 | 第59页 |
| ·不同农杆菌菌株对转化效率的影响 | 第59页 |
| ·不同性状突变子的筛选 | 第59-60页 |
| ·本章小结 | 第60-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 致谢 | 第67页 |